[发明专利]具有RUVC结构域的酶

权利要求书

1.一种工程改造的核酸酶系统，其包含：

(a)包含RuvC_III结构域和HNH结构域的核酸内切酶，其中所述核酸内切酶源自未培养的微生物，并且其中所述核酸内切酶是2类II型Cas核酸内切酶；和

(b)工程改造的指导核糖核酸结构，其被构造成与所述核酸内切酶形成复合物，所述复合物包含：

i.指导核糖核酸序列，其被构造成与靶脱氧核糖核酸序列杂交；和

ii.tracr核糖核酸序列，其被构造成与所述核酸内切酶结合。

2.如权利要求1所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述RuvC_III结构域包含与SEQID NO:45-88或SEQ ID NO:246-262中任一个具有至少70％、至少75％、至少80％或至少90％序列同一性的序列。

3.一种工程改造的核酸酶系统，其包含：

(a)包含与SEQ ID NO:45-88或SEQ ID NO:246-262中任一个具有至少75％序列同一性的RuvC_III结构域的核酸内切酶；和

(b)工程改造的指导核糖核酸结构，其被构造成与所述核酸内切酶形成复合物，所述复合物包含：

i.指导核糖核酸序列，其被构造成与靶脱氧核糖核酸序列杂交；和

ii.tracr核糖核酸序列，其被构造成与所述核酸内切酶结合。

4.一种工程改造的核酸酶系统，其包含：

(a)被构造成与包含SEQ ID NO:149-158的前间区序列邻近基序(PAM)序列结合的核酸内切酶，其中所述核酸内切酶是2类II型Cas核酸内切酶；和

(b)工程改造的指导核糖核酸结构，其被构造成与所述核酸内切酶形成复合物，所述复合物包含：

i.指导核糖核酸序列，其被构造成与靶脱氧核糖核酸序列杂交；和

ii.tracr核糖核酸序列，其被构造成与所述核酸内切酶结合。

5.如权利要求4所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述核酸内切酶不是Cas9核酸内切酶、Cas14核酸内切酶、Cas12a核酸内切酶、Cas12b核酸内切酶、Cas 12c核酸内切酶、Cas12d核酸内切酶、Cas12e核酸内切酶、Cas13a核酸内切酶、Cas13b核酸内切酶、Cas13c核酸内切酶或Cas 13d核酸内切酶。

6.如权利要求4所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述核酸内切酶与Cas9核酸内切酶具有小于80％的同一性。

7.如权利要求3-6中任一项所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述核酸内切酶进一步包含HNH结构域。

8.如权利要求1-7中任一项所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述tracr核糖核酸序列包含与选自SEQ ID NO:138-148或SEQ ID NO:280中任一个的约60至90个连续核苷酸具有至少80％序列同一性的序列。

9.一种工程改造的核酸酶系统，其包含：

(a)工程改造的指导核糖核酸结构，其包含：

指导核糖核酸序列，其被构造成与靶脱氧核糖核酸序列杂交；和

tracr核糖核酸序列，其被构造成与核酸内切酶结合，

其中所述tracr核糖核酸序列包含与选自SEQ ID NO:138-148或SEQ ID NO:280中任一个的约60至90个连续核苷酸具有至少80％序列同一性的序列；和

(b)2类II型Cas核酸内切酶，其被构造成与所述工程改造的指导核糖核酸结合。

10.如权利要求1-3或9中任一项所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述核酸内切酶被构造成与选自包含SEQ ID NO:149-158的组的前间区序列邻近基序(PAM)序列结合。

11.如权利要求1-9中任一项所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述工程改造的指导核糖核酸结构包含至少两个核糖核酸多核苷酸。