[发明专利]具有RUVC结构域的酶

权利要求书

1.一种工程改造的核酸酶系统，其包含：

(a)包含RuvC_III结构域和HNH结构域的核酸内切酶，其中所述核酸内切酶源自未培养的微生物，其中所述核酸内切酶是2类II型Cas核酸内切酶；和

(b)工程改造的指导核糖核酸结构，其被构造成与所述核酸内切酶形成复合物，所述复合物包含：

(i)指导核糖核酸序列，其被构造成与靶脱氧核糖核酸序列杂交；和

(ii)tracr核糖核酸序列，其被构造成与所述核酸内切酶结合。

2.如权利要求1所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述RuvC_III结构域包含与SEQID NO:1827-3637中任一个具有至少70％、至少75％、至少80％或至少90％序列同一性的序列。

3.一种工程改造的核酸酶系统，其包含：

(a)包含与SEQ ID NO:1827-3637中任一个具有至少75％序列同一性的RuvC_III结构域的核酸内切酶；和

(b)工程改造的指导核糖核酸结构，其被构造成与所述核酸内切酶形成复合物，所述复合物包含：

(i)指导核糖核酸序列，其被构造成与靶脱氧核糖核酸序列杂交；和

(ii)tracr核糖核酸序列，其被构造成与所述核酸内切酶结合。

4.一种工程改造的核酸酶系统，其包含：

(a)核酸内切酶，该核酸内切酶被构造成与包含SEQ ID NO:5512-5537的前间区序列邻近基序(PAM)序列结合，其中所述核酸内切酶是2类II型Cas核酸内切酶；和

(b)工程改造的指导核糖核酸结构，其被构造成与所述核酸内切酶形成复合物，所述复合物包含：

(i)指导核糖核酸序列，其被构造成与靶脱氧核糖核酸序列杂交；和

(ii)tracr核糖核酸序列，其被构造成与所述核酸内切酶结合。

5.如权利要求4所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述核酸内切酶源自未培养的微生物。

6.如权利要求4-5中任一项所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述核酸内切酶未被工程改造以结合不同的PAM序列。

7.如权利要求4所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述核酸内切酶不是Cas9核酸内切酶、Cas14核酸内切酶、Cas12a核酸内切酶、Cas12b核酸内切酶、Cas12c核酸内切酶、Cas12d核酸内切酶、Cas12e核酸内切酶、Cas13a核酸内切酶、Cas13b核酸内切酶、Cas13c核酸内切酶或Cas13d核酸内切酶。

8.如权利要求4所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述核酸内切酶与Cas9核酸内切酶具有小于80％的同一性。

9.如权利要求3-8中任一项所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述核酸内切酶进一步包含HNH结构域。

10.如权利要求1-9中任一项所述的工程改造的核酸酶系统，其中所述tracr核糖核酸序列包含与选自SEQ ID NO:5476-5511和SEQ ID NO:5538中任一个的约60至90个连续核苷酸具有至少80％序列同一性的序列。

11.一种工程改造的核酸酶系统，其包含：

(a)工程改造的指导核糖核酸结构，其包含：

(i)指导核糖核酸序列，其被构造成与靶脱氧核糖核酸序列杂交；和

(ii)tracr核糖核酸序列，其被构造成与核酸内切酶结合，

其中所述tracr核糖核酸序列包含与选自SEQ ID NO:5476-5511和SEQ ID NO:5538中任一个的约60至90个连续核苷酸具有至少80％序列同一性的序列；和

(b)2类II型Cas核酸内切酶，其被构造成与所述工程改造的指导核糖核酸结合。