[发明专利]产生和扩增造血干细胞的方法

权利要求书

1.一种产生造血干细胞(HSC)的肝脏类器官的生产方法，包括：

在足以将前肠球状体分化为肝脏类器官的条件下培养所述前肠球状体；

其中所述肝脏类器官包含分化成造血干细胞的CD34⁺成血内皮细胞群；和

其中所述前肠球状体包含间充质。

2.根据权利要求1所述的方法，其中培养所述前肠球状体还包括使所述前肠球状体与Notch激活剂或配体接触。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述Notch激活剂或配体包含DLL1、DLL3、DLL4、JAG1或JAG2中的一种或多种或其任何组合。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述Notch激活剂或配体包含表达DLL1、DLL3、DLL4、JAG1或JAG2中的一种或多种或其任何组合的细胞。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述前肠球状体还包含表达一种或多种Notch激活剂或配体的细胞，所述Notch激活剂或配体选自DLL1、DLL3、DLL4、JAG1或JAG2或其任何组合。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述前肠球状体表达一种或多种Notch激活剂或配体，所述Notch激活剂或配体选自DLL1、DLL3、DLL4、JAG1或JAG2或其任何组合。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中培养所述前肠球状体还包括使所述前肠球状体与IL-3、IL-34或GM-CSF中的一种或多种或其任何组合接触。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中培养所述前肠球状体还包括使所述前肠球状体与干细胞因子(SCF)或血小板生成素(TPO)或两者接触。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中培养所述前肠球状体不包括使所述前肠球状体与视黄酸(RA)接触。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中培养所述前肠球状体不包括使所述前肠球状体与地塞米松、制瘤素M或肝细胞生长因子中的一种或多种或其任何组合接触。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述造血干细胞不外源性表达ERG、HOXA5、HOXA9、HOXA10、LCOR、RUNX1、SPI1、FOSB或GFI1中的一种或多种或其任何组合。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括从所述肝脏类器官分离成血内皮细胞群或造血干细胞或两者。

13.根据权利要求12所述的方法，其中分离所述成血内皮细胞群或造血干细胞或两者是通过从所述肝脏类器官中分选为CD34+、CD45+或两者的细胞群进行的。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括：

在足以将诱导多能干细胞分化成定形内胚层的条件下培养所述诱导多能干细胞；和

在足以将所述定形内胚层分化为前肠球状体的条件下培养所述定形内胚层；

然后在足以将所述前肠球状体分化为所述肝脏类器官的条件下培养所述前肠球状体。

15.由前述权利要求中任一项所述的方法产生的肝脏类器官。

16.由前述权利要求中任一项所述的方法产生的成血内皮细胞群。

17.由前述权利要求中任一项所述的方法产生的造血干细胞。

18.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，还包括从所述肝脏类器官中分离淋巴样细胞。