[发明专利]针对LILRB2的单域抗体

说明书

本发明涉及针对白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2(LILRB2)的单域抗体(sdAb)、包括其的药物组合物和其在诊断和治疗中的用途。

技术领域

本发明属于免疫治疗和免疫诊断领域。本发明提供针对白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2(LILRB2)的单域抗体(sdAb)。

技术背景

白细胞免疫球蛋白(Ig)样受体(LILBR)是抑制性受体，其细胞质尾部由ITIM(基于免疫受体酪氨酸的抑制基序)构成。虽然LILRB1在所有免疫细胞亚群上表达，但LILRB2表达仅限于抗原呈递细胞(APC)，例如单核细胞、树突状细胞和巨噬细胞。

LILRB2与CD1d、补体级联中的几种分子(C4d、C3d、C4b、C3b和iC3b)、血管生成素样2和5(ANGPTL2/5)蛋白、B-淀粉样蛋白1-42和髓磷脂衍生抑制剂(Nogo66，MAG)并且与经典(HLA-A、-B和-C)或非经典MHC I类分子(HLA-E、F和G)相互作用。特别证明了在免疫细胞上表达的LILRB2与HLA-G之间的相互作用抑制细胞功能并能够诱导免疫抑制细胞。事实上，树突状细胞(DC)中存在的HLA-G与LILRB2之间的相互作用抑制了它们的成熟并使它们产生耐受性。

有趣的是，显示LILRB2受体在几种类型的癌症中表达，并且经常与转移相关。尽管LILRB2是一种抑制性受体，但其在肿瘤中的表达显示可增加肿瘤细胞的增殖和运动性。事实上，在与HLA-G或ANGPTL2结合后，LILRB2受体抑制遏制肿瘤细胞增殖、生长和传播的途径。值得注意的是，LILRB2由肿瘤相关巨噬细胞(TAM)表达，尤其是在实体肿瘤的情况下。这些巨噬细胞显示出与抑制免疫细胞浸润和有利于癌细胞增殖的功能相关的M2表型。由于LILRB2受体表达仅限于健康个体中的APC，其在肿瘤中的新表达以及其由耐受源性DC和TAM的强烈上调使LILRB2受体成为免疫治疗靶向的极好肿瘤相关抗原(TAA)。

然而，迄今为止，还没有能够阻断LILRB2的有效免疫治疗剂。阻断性抗LILRB2单克隆抗体(mAb)的生成将为新的免疫治疗铺平道路。然而，mAb的大尺寸(约150kDa)是一个主要缺点，因为大尺寸抑制了它们的肿瘤渗透，且因此限制了它们在实体癌中的应用，实体癌仍然是最难治疗的癌症。因此，本领域中仍然非常需要靶向此类癌症的新的和改进的药剂。

骆驼科成员自然产生不同类别的抗体：(i)含有两条轻链和两条重链(约150kDa)的常规重链抗体，(ii)仅包括H链的同源二聚重链抗体(HcAb；约95kDa)，以及(iii)基于独特重链的其它IgG同型。这些仅重链抗体已证明对其抗原具有高结合亲和力和特异性，类似于传统的mAb。

来自HcAb的重链可变域(即单域抗体(sdAb)或(Nb))负责抗原结合和特异性，并且可以从HcAb中分离出来而不会失去其结合特性。它们的体积较小，通常约为15-20kDa，在靶向实体肿瘤时是一个重要的优势。事实上，它们应该能够更有效地穿透癌细胞周围的纤维微环境，并到达定居在这种基质中的例如巨噬细胞等靶细胞。然后，在靶向实体肿瘤和TAM上展示的LILRB2受体方面，sdAb是极好的候选者。

本发明人现在已在开发抗LILRB2单域抗体(sdAb)方面对本领域作出了重大的技术贡献。

发明内容

本发明涉及特异性结合或特异性识别白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2(LILRB2)，优选人LILRB2的单域抗体(sdAb)。

优选地，所述sdAb抗LILRB2不结合白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员1(LILRB1)，优选人LILRB1。

在一个方面，根据本发明的sdAb包括至少一个互补决定区(CDR)，其包括SEQ IDNO:3、6、9、12、15、18、21、24、27、30或33中所示的序列或由所述序列组成，或包括由于一个、两个或三个氨基酸修饰而与SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、24、27、30或33不同的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。