[发明专利]阿尔茨海默氏病的基因疗法

说明书

提供了用于预防、抑制或治疗哺乳动物的与APOE4表达相关的疾病或病症的组合物和方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年10月16日提交的美国申请第62/915,988号的权益，所述美国申请的公开内容通过引用并入本文。

背景技术

载脂蛋白E(APOE)是一种重要的与最常见的阿尔茨海默氏病(Alzheimer'sdisease，AD)迟发性家族性和散发性形式(Yu等人,2014)的发病机制密切相关的中枢神经系统(CNS)载脂蛋白。在一般群体中，存在3种常见的编码主要在肝脏和脑中表达的3种APOE同种型的APOE等位基因(ε4、ε3和ε2)。APOE4携带者患上AD的风险显著增加(与APOE3纯合子相比，杂合子和纯合子分别为3-15倍)并且患上疾病的发病年龄更早(对于每个ε4等位基因，大约5年；Corder等人,1993；Farrer等人,1997；Lambert等人,2013；Saunders等人,1993；Strittmatter等人,1993)。45％的AD患者携带至少1个ε4等位基因(相比之下，只有15％的年龄匹配的健康对照)的事实使APOE4成为迄今为止最常见的迟发性AD(最常见的AD形式)的遗传风险因素。相比之下，APOE2是一种将AD风险降低大约50％并显著延迟发病年龄的保护性等位基因(Corder等人,1994；Farrer等人,1997；Suri等人,2013；Talbot等人,1994；Yu等人,2014)。

APOE3(最常见的同种型)与APOE2和APOE4之间的主要生理差异是由于2个位置中的1个位置处的氨基酸差异而造成的，即残基112(APOE4)和158(APOE2)，所述残基是半胱氨酸-精氨酸互换(Hatters等人,2006)。这2个氨基酸的差异导致蛋白质结构的差异、以及这些APOE同种型与脂蛋白、脂蛋白受体的对应的结合亲和力以及调节Aβ聚集、降解、流出和吞噬作用的差异(Castellano等人,2011；Deane等人,2008；Hashimoto等人,2012；Hatters等人,2006；Holtzman等人,2012；Li等人,2012；Manelli等人,2004；Walker等人,2000；Yu等人,2014；Zhao等人,2009)。

发明内容

在一个实施例中，本公开提供了一种针对阿尔茨海默氏病的基因疗法载体。在一个实施例中，基因疗法载体包括编码人APOE2基因和靶向内源性APOE4的顺式或反式人工微小RNA的AAV表达载体。此载体系统与来自基因疗法载体(例如，AAV载体)的有益APOE2基因的补充组合使有害内源性APOE4的表达沉默。如本文所公开的，设计了靶向内源性APOE4mRNA以进行抑制的示例性人工微小RNA序列。微小RNA(miRNA)可以并入处于APOE2编码序列的5'端的序列中，例如内含子中(如CAG启动子内含子)，或并入处于APOE2编码序列的3'端的序列中，例如处于编码人APOE2编码序列的载体转基因质粒的polyA尾的5'端的序列。可替代地，可以将微小RNA插入在PolIII启动子(例如，U6启动子)与APOE2表达盒的polyA位点之后的终止子之间。载体衍生的人APOE2 DNA序列任选地包含沉默核苷酸变化以减少或抑制微小RNA的抑制，并且在一个实施例中可以包含用于检测(例如，用于临床前检测研究)的标签，如HA标签。在一个实施例中，将所述表达构建体包装到血清型的AAV衣壳中，所述血清型靶向星形胶质细胞和胶质细胞(例如，AAV9)，即CNS中内源性APOE表达的突出位点，但可以提供在其它载体中，例如其它病毒载体、质粒、纳米颗粒或脂质体。