[发明专利]一种以hspa12b作为糖尿病治疗靶点的检测方法

权利要求书

1.一种hspa12b作为糖尿病治疗靶点的检测方法，其特征在于，所述检测方法是检测hspa12b在小鼠饥饿后肝脏组织中的表达变化，hspa12b敲除小鼠糖耐量，丙酮酸耐量以及肝脏组织糖异生相关基因PGC1α、pepck、G6pase的改变；

所述hspa12b在小鼠饥饿后肝脏组织中的表达变化的检测方法包括：

A1、提取正常饮食和禁食的野生型小鼠肝脏组织；

A2、提取肝脏组织总RNA；

A3、RNA经逆转录成cDNA后，进行实时荧光定量PCR检测；

A4、确认实时荧光定量PCR的扩增曲线和溶解曲线，计算hspa12b的相对定量值；

所述肝脏组织糖异生相关基因PGC1α、pepck、G6pase的改变的检测方法包括：

D1、hspa12b敲除小鼠；

D2、分别取hspa12b敲除小鼠和野生型小鼠肝脏组织；

D3、提取肝脏组织总RNA；

D4、RNA经逆转录成cDNA后，进行实时荧光定量PCR检测；

D5、计算PGC1α、pepck、G6pase的相对定量值；

D6、计算hspa12b敲除小鼠肝脏组织中糖异生相关基因PGC1α、pepck、G6pase与野生型小鼠肝脏组织中糖异生相关基因PGC1α、pepck、G6pase表达差异；最终确定hspa12b为糖尿病治疗靶点。

2.根据权利要求1所述的一种hspa12b作为糖尿病治疗靶点的检测方法，其特征在于，所述hspa12b敲除小鼠糖耐量检测方法包括：

B1、小鼠称重后禁食；

B2、向禁食小鼠腹腔内注射葡萄糖；

B3、hspa12b敲除小鼠；

B4、阶段性测小鼠血糖；

B5、观察结果，对比分析。

3.根据权利要求1所述的一种hspa12b作为糖尿病治疗靶点的检测方法，其特征在于，所述丙酮酸耐量检测方法包括：

C1、小鼠禁食；

C2、向禁食小鼠腹腔注射丙酮酸；

C3、hspa12b敲除小鼠；

C4、阶段性测小鼠血糖；

C5、观察结果，对比分析。

4.根据权利要求1所述的一种hspa12b作为糖尿病治疗靶点的检测方法，其特征在于，所述检测hspa12b在饥饿小鼠的肝脏组织中表达变化包括第一实时荧光定量PCR检测试剂，第一实时荧光定量PCR检测试剂包括hspa12b的特异性引物和内参照TBP的特异性引物。

5.根据权利要求4所述的一种hspa12b作为糖尿病治疗靶点的检测方法，其特征在于，所述hspa12b的特异性引物包括hspa12b的特异性正向引物和hspa12b的特异性反向引物。

6.根据权利要求4所述的一种hspa12b作为糖尿病治疗靶点的检测方法，其特征在于，所述检测肝脏组织糖异生相关基因PGC1α、pepck、G6pase的改变包括第二实时荧光定量PCR检测试剂。

7.根据权利要求6所述的一种hspa12b作为糖尿病治疗靶点的检测方法，其特征在于，所述第二实时荧光定量PCR检测试剂包括PGC1α的特异性引物、pepck的特异性引物、G6pase的特异性引物和内参照TBP的特异性引物。

8.根据权利要求7所述的一种hspa12b作为糖尿病治疗靶点的检测方法，其特征在于，所述PGC1α的特异性引物包括PGC1α的特异性正向引物和PGC1α的特异性反向引物；pepck的特异性引物包括pepck的特异性正向引物和pepck的特异性反向引物；G6pase的特异性引物包括G6pase的特异性正向引物和G6pase的特异性反向引物。

9.根据权利要求4所述的一种hspa12b作为糖尿病治疗靶点的检测方法，其特征在于，所述内参照TBP的特异性引物包括TBP的特异性正向引物和TBP的特异性反向引物。