[发明专利]外泌体mRNA在乳腺疾病诊断中的应用

说明书

本发明涉及生物医学诊断领域，具体而言，涉及一种外泌体mRNA在乳腺疾病诊断中的应用。利用本发明可以对乳腺结节患者进行良恶性鉴别，有效区分乳腺癌与其他恶性肿瘤实现乳腺癌的精确诊断，并且能够对患者治疗效果进行监控。本发明首次发现外泌体mRNA标志物可用于乳腺疾病的诊断。

技术领域

本发明涉及生物医学诊断领域，具体而言，涉及一种外泌体mRNA在乳腺疾病诊断中的应用。

背景技术

乳腺癌(mammary cancer)是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率占全身各种恶性肿瘤的7-10%，在妇女仅次于子宫癌，已成为威胁妇女健康的主要病因。它的发病常与遗传有关，以及40-60岁之间，绝经期前后的妇女发病率较高。它是一种通常发生在乳房腺上皮组织，严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。乳腺癌男性罕见，仅约1-2%的乳腺患者是男性。

近年来我国乳腺癌的发病率呈迅速上升趋势，在女性各肿瘤中居首位。由于乳腺癌病因尚不明确，早期诊断和早期综合治疗是防治乳腺癌的最有效的手段。有研究表明，其原发灶越小，预后越好。T4、T3、T2、T1期乳腺癌的10年生存率分别为19.7%，46.0%，62.6%，87.8%。直径小于1cm的微小癌，其10年总体生存率在90%-99%。

目前，我国对乳腺癌的预警和早期诊断的技术主要有以下四种：

1.临床体格检查：定期接受临床体格检查是早期发现乳腺癌的有效方法之一。我国也开展了一系列乳腺癌的预防工作，但是，乳腺癌普查耗资巨大，成本/效果比高。

2.影像学诊断法：影像学检查是以钼靶X线摄片为主要手段，辅以超声扫描和MRI扫描。钼靶X线摄片方法能发现细小钙化点，但对于不典型的病变，尤其是致密型乳腺内的病变及近胸壁的病变易漏诊。2014年2月11日发表在著名的《英国医学杂志》上一项研究报告40～59岁女性的每年乳腺钼靶X线检查并不能降低乳腺癌的死亡率，也不优于普通体检的诊断率，而且有22％的女性因为乳腺钼靶X线检查被过度诊断了(BritishMedicalJournal,2014,348.)。另外，我国女性乳腺小而致密，这也会降低患者接受钼靶检查的阳性率。

3.生物靶标早期检测：包括乳腺癌相关基因普查，例如BRCA1和BRCA2的突变分析，但目前分子诊断研究大多关注基因多态性与乳腺癌的关系，只能给出患者的易感风险，不适用于临床疾病的诊断。另外临床上最常用的乳腺癌血清肿瘤标志物有CA-153、CEA、CA-125等，虽然可以一定程度上反应疾病的状态，但是特异性并不高，在很多其他肿瘤，如卵巢癌、盆腔肿瘤、胃癌、结肠癌、肝癌等都会相应存在。据报道CA-153的敏感性仅仅为50%左右，在早期乳腺癌患者中的表达水平往往较低，而且特异性也不高，对于乳腺癌的早期筛查方面有一定的局限性。

4.穿刺活检：乳腺组织穿刺活检的病理学检查准确性较高，但为有创性操作，还会因标本取材不足而产生假阴性结果，亦或因取材部位的不同、乳腺癌瘤内异质性的影响而产生不同的结果。

总的来说：对于乳腺结节的筛查有着以下不足：（1）临床体检耗资大；（2）影像学诊断法阳性漏检率高；（3）目前现在的较为成熟的生物靶标，只能做风险评估，不适于临床诊断；（4）穿刺活检首先是有创性，另外对于取样者及穿刺部位要求较高，容易因外在因素的影响造成不同的结果。因此，本领域迫切需要建立新的乳腺结节检查技术，能够早期客观、灵敏和稳定的诊断乳腺癌,以便进行及时、有针对性的治疗，提高患者的生存质量和生存率，降低医疗成本，节约社会资源。

发明内容

外泌体一般认为是一类直径30-150nm，具有完整膜结构的细胞外囊泡，主要负责细胞间的物质运输和信息传递，其中包裹有细胞特异性的蛋白质、脂类和核酸。现有的研究表明外泌体在很多生理病理过程中扮演重要的角色，如抗原呈递、肿瘤生长和转移等。所有的细胞都会分泌外泌体，而肿瘤细胞分泌的外泌体多于正常细胞。