[发明专利]一种用于鲑鳟鱼养殖的寄生虫快速酶免疫检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于鲑鳟鱼养殖的寄生虫快速酶免疫检测试剂盒，其特征在于，包括寄生虫特异性抗原包被板、含有0.5％吐温的0.1M磷酸盐缓冲液、酶标抗原溶液、30％过氧化氢溶液、四甲基联苯胺显色剂、2N硫酸溶液、阳性对照血清和阴性对照血清。

2.根据权利要求1所述一种用于鲑鳟鱼养殖的寄生虫快速酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述寄生虫特异性抗原包被板是将寄生虫虫体可溶性抗原包被于96孔板。

3.根据权利要求2所述一种用于鲑鳟鱼养殖的寄生虫快速酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述寄生虫特异性抗原包被板的具体制备方法为：用pH为9.5的0.05M碳酸盐缓冲液将寄生虫虫体可溶性抗原溶液稀释至蛋白浓度为0.5mg/mL，向96孔板每个孔中加入100μL稀释后的寄生虫虫体可溶性抗原溶液，密封孔板并置于4℃下保存18h；在每个孔中加入含有5wt％普通山羊血清的磷酸盐缓冲溶液300μL，4℃放置8h去除未吸附的抗原；去除孔中剩余液体，真空冻干、真空封装后置于4℃保存备用。

4.根据权利要求3所述一种用于鲑鳟鱼养殖的寄生虫快速酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述寄生虫虫体可溶性抗原的制备方法为显微镜下将寄生于鱼体的寄生虫取下，放入生理盐水中，虫体密度达到10⁶～10⁷/mL时，4℃下离心收集虫体，用pH7.0的PBS缓冲液清洗虫体3次，清洗后的虫体按虫体压积量加5倍体积的pH7.0的PBS缓冲液，在液氮和45℃水浴中反复冻融10次后在冰浴中超声粉碎，4℃离心，上清即为寄生虫虫体可溶性抗原。

5.根据权利要求1-4任一所述一种用于鲑鳟鱼养殖的寄生虫快速酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述寄生虫为三代虫、小瓜虫、指环虫、复口吸虫和/或车轮虫。

6.根据权利要求5所述一种用于鲑鳟鱼养殖的寄生虫快速酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述酶标抗原溶液的制备方法为取寄生虫虫体可溶性抗原10mg，加N,N-二甲基甲酰胺200μL溶解抗原得到Ⅰ液；取辣根过氧化物酶100mg，加蒸馏水溶解，加入EDC10mg并搅拌30min，得到Ⅱ液；将Ⅰ液滴加到Ⅱ液中，4℃避光反应18h，将反应液在4℃、pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液中透析3天，得到酶标抗原溶液。

7.根据权利要求6所述一种用于鲑鳟鱼养殖的寄生虫快速酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述四甲基联苯胺显色剂为2mg/mL四甲基联苯胺无水乙醇溶液。

8.根据权利要求7所述一种用于鲑鳟鱼养殖的寄生虫快速酶免疫检测试剂盒，其特征在于，阳性对照血清为被所检测寄生虫感染的鲑鳟鱼血清的灭活样本，含有0.01wt％的硫柳汞；阴性对照血清为健康鲑鳟鱼血清样本，含有0.01wt％的硫柳汞。