[发明专利]C种戊型肝炎病毒239蛋白制备病毒样颗粒的方法和应用

说明书

本发明属分子生物学和病毒学技术领域，提供C种戊型肝炎病毒239蛋白制备病毒样颗粒的方法和应用。239蛋白包涵体用4M尿素稀释至1mg/ml，透析至含有(NHsubgt;4/subgt;)subgt;2/subgt;SOsubgt;4/subgt;、Nasubgt;2/subgt;SOsubgt;4/subgt;或NHsubgt;4/subgt;Cl盐离子、pH4.5‑7.5的50mM PB组装缓冲液中；透析温度为4‑37℃；搅拌30min‑12h。本发明还涉及上述蛋白和病毒样颗粒用于制备药物组合物或疫苗的用途，用于预防或治疗HEV‑C感染及由HEV‑C感染所导致的疾病如戊型肝炎等。可应用于大规模生产HEV‑C疫苗的病毒样颗粒。该病毒样颗粒具有良好免疫原性和免疫反应性，由重组HEV‑C E2s 239‑aa结构蛋白在体外制备而成，且制备方法简便高效。

技术领域

本发明属于分子生物学和病毒学技术领域，具体涉及C种戊型肝炎病毒239蛋白制备病毒样颗粒的方法和应用。该蛋白质能够在体外组装成C种戊型肝炎（HEV-C）病毒样颗粒，具体涉及能够在体外组装成HEV-C病毒样颗粒的蛋白质，其编码序列和制备方法，以及包含该蛋白质的病毒样颗粒的组装方法；所述蛋白和病毒样颗粒可用于预防或治疗HEV-C感染及由HEV-C感染所导致的疾病。本发明还涉及上述蛋白和病毒样颗粒用于制备药物组合物或疫苗的用途，所述药物组合物或疫苗用于预防或治疗HEV-C感染及由HEV-C感染所导致的疾病如戊型肝炎等。此外，本发明还提供了制备HEV-C病毒样颗粒的方法。

背景技术

戊型病毒性肝炎（简称戊肝）由戊肝病毒（HEV）引起，以肝脏炎症和坏死性病变为主的急性病毒性肝炎。HEV主要流行于大多数热带和一些发展中国家，受HEV感染威胁的人口约占世界人口的2/3，每年约有2000万人新发感染HEV，每年约7万人死于HEV相关症状，戊肝已成为一个重要的公共卫生问题。近十年我国约有25万戊肝病例，且呈逐年增高的趋势。世界卫生组织（WHO）宣布将于2030年消除病毒性肝炎作为重大公共卫生威胁的总体目标。戊肝是一种自限性疾病，一般情况下预后良好，但在老年人、免疫低下人群、慢性肝病病人及孕妇中可能产生严重的后果。目前尚无有效的药物能改变急性戊肝的病程，通常是对症治疗，接种疫苗是预防控制戊肝的最有效的办法。

HEV病毒颗粒为正二十面体，直径约27-35nm，无囊膜。HEV基因组由单股正链RNA组成，全长约7.2kb。5’末端含有甲基鸟嘌呤帽子结构，3’末端带有poly A尾部。国际病毒分类委员将戊肝病毒科分为2个属：正戊肝病毒属和鱼戊肝属。鱼戊肝属只包含一个A种，主要感染鲑鱼。正戊肝病毒属包含了A、B、C、D，4个种。其中C种病毒（HEV-C）划分为感染啮齿动物的HEV-C1(大鼠HEV)，感染雪貂和貂的HEV-C2，以及最近在中国的高山姬鼠和黑腹绒鼠中检测到的HEV-C3和HEV-C4。在欧洲和美国的黑鼠(家鼠)和挪威鼠(褐家鼠)，以及亚洲国家的黄胸家鼠、黄毛家鼠中均发现了属于HEV-C的病毒株。对挪威大鼠和黑鼠进行HEV-C的IgG和IgM检测，结果显示血清阳性率在24%至37%之间，表明HEV-C在与人类活动密切相关动物大鼠中广泛传播。有研究报道德国健康的林业工作者体内存在HEV‐C抗体，有些急性肝炎患者的血清中也存在抗HEV‐C的IgG和IgM，推测HEV‐C可感染人类。

近期发现一例肝移植病例因感染HEV-C而导致戊型肝炎，在该病人体内检测到了HEV-C的RNA和HEV-C抗体，证实HEV-C可感染人类并引起临床疾病。虽然该肝移植病人体内已有HEV-A抗体，但仍能被HEV-C感染，表明针对HEV-A的抗体并不能有效保护机体免受HEV-C感染。一系列的研究结果表明有必要重新评价HEV-C作为一种人畜共患肝炎病毒的潜在威胁。目前有关HEV病毒样颗粒的专利中所记载的蛋白质为HEV 1-4型病毒结构蛋白，根据ICTV分类，HEV基因型1、2、3、4都属于HEV-A，因此现有关于HEV病毒样颗粒及疫苗的研究仍然是针对HEV-A进行的优化设计，并没有特定针对HEV-C病毒样颗粒及疫苗的设计。