[发明专利]一种石花菜的组织培养及其定植方法

权利要求书

1.一种石花菜的组织培养及其定植方法，其特征在于，以素色棉麻布做为石花菜的附着基，进行组织培养与定植；包括：

A、苗种的选取与暂养：用毛刷将石花菜在消毒海水中反复刷洗，再将其用无菌海水冲洗，然后置于培养箱中充气暂养；

B、苗种的消毒与切断：取生长状况良好的石花菜主枝或分枝作为原材料，用毛刷在消毒海水中反复刷洗，在无菌海水中超声处理，再消毒后用无菌海水冲洗，切段备用，获得段状石花菜；

C、附着基的选取与处理：选用素色棉麻布作为附着基质，将其裁剪成与无菌培养皿底部直径大小一致后，煮沸并灭菌，烘干后放凉备用，获得素色棉麻布附着基；

D、接种：在无菌培养皿中加入培养基与所述素色棉麻布附着基，然后将所述段状石花菜分散于所述素色棉麻布附着基上，进行密封培养；

E、培养：保持适当光照，经过30～40天的密封培养，获得石花菜幼苗，附着在所述素色棉麻布附着基上；

F、定植：将附着在所述素色棉麻布附着基上的所述石花菜幼苗悬浮于水面以下，给水体充气，使水体呈流动状态，适量添加营养盐，定植生长，获得人工石花菜；

所述培养基由MES培养基、10～15mg/L NaNO₃、1～2mg/L KH₂PO₄、0.1～0.2mg/L吲哚乙酸组成。

2.如权利要求1所述石花菜的组织培养及其定植方法，其特征在于，包括：

A、苗种的选取与暂养：用毛刷将石花菜在消毒海水中反复刷洗，再将其用无菌海水冲洗，然后置于15～20℃，20～30μmol photons m^-2s^-1，光照周期12L：12D，盐度为33～35psu的培养箱中充气暂养3～5天；

B、苗种的消毒与切断：取生长状况良好的石花菜主枝或分枝作为原材料，用毛刷在消毒海水中反复刷洗，然后用超声波清洗仪在无菌海水中超声处理3～5分钟，再用75％～90％酒精消毒10～15s，再转移至1％～2％NaClO中消毒20～30s，最后用无菌海水冲洗4～5遍，用灭菌的手术刀切成2～4mm长的切段备用，获得所述段状石花菜；

C、附着基的选取与处理：选用素色棉麻布作为附着基质，将其裁剪成与无菌培养皿底部直径大小一致后，将其置于开水中煮沸1～1.5小时，再置于高压灭菌锅中100～120℃灭菌20～30分钟，烘干后放凉备用，获得所述素色棉麻布附着基；

D、接种：在无菌培养皿中加入所述培养基与所述素色棉麻布附着基，然后将所述段状石花菜分散于所述素色棉麻布附着基上，每个培养皿接种3～9块石花菜切段，然后用封口膜将其封好进行密封培养；

E、培养：将接种完成的所述无菌培养皿放置在光照培养箱中，温度保持在18～24℃，光照强度20～30μmol photons m^-2s^-1，光周期为12L：12D，所述培养基每5～7天更换一次，经过30～40天的密封培养，获得所述石花菜幼苗，附着在所述素色棉麻布附着基上；

F、定植：将附着在所述素色棉麻布附着基上的所述石花菜幼苗悬浮于水面以下10～20cm，给水体充气，使水体呈流动状态，每5～7天换清洁海水50％～60％，每10～14天刷池并更换清洁海水90％～100％，适量添加营养盐，定植生长，获得所述人工石花菜。

3.如权利要求1所述石花菜的组织培养及其定植方法，其特征在于，步骤B和步骤D在超净工作台内完成。

4.如权利要求1所述石花菜的组织培养及其定植方法，其特征在于，步骤D中，所述培养基的更换通过15ml移液枪完成；步骤F中，所述营养盐的添加量为10～15mg/LNaNO₃、1～2mg/L KH₂PO₄。