[发明专利]一种用于糖蛋白合成的基于原核生物的无细胞系统

权利要求书

1.一种用于生产糖基化蛋白的重组系统，所述系统包括：

适于合成糖蛋白靶点的试剂；

能够在重组系统中将真核生物聚糖由原核生物脂质载体分子转移至糖蛋白靶点的分离的原核生物寡糖转移酶；

一种或多种分离的真核生物聚糖，其中各真核生物聚糖均包含GlcNAc₂核并与原核生物脂质载体分子连接；和

糖蛋白靶点，其包括一个或多个聚糖接受体氨基酸残基，或者编码所述糖蛋白靶点的核酸分子，其中所述试剂、所述分离的原核生物寡糖转移酶、所述一种或多种分离的真核生物聚糖和所述重组系统的糖蛋白靶点是无细胞的。

2.根据权利要求1所述的系统，其中所述原核生物寡糖转移酶来源于弯曲杆菌属(Campylobacter)。

3.根据权利要求1所述的系统，其中所述脂质载体分子包括十一碳二烯磷酸酯。

4.根据权利要求1所述的系统，其中所述真核生物聚糖进一步包括至少一个甘露糖残基。

5.根据权利要求1所述的系统，其中所述真核生物聚糖包括选自Man1GlcNAc₂、Man₂GlcNAc₂和Man₃GlcNAc₂的组分。

6.根据权利要求1所述的系统，其中所述糖蛋白靶点的一个或多个聚糖接受体氨基酸残基是天冬酰胺残基。

7.根据权利要求6所述的系统，其中糖蛋白靶点进一步包括N-X₁-S/T或D/E-X₁-N-X₂-S/T聚糖接受体氨基酸序列基序，其中D是天冬氨酸、E是谷氨酸、X₁和X₂是脯氨酸以外的任意氨基酸、N是天冬酰胺、S是丝氨酸和T是苏氨酸。

8.根据权利要求1所述的系统，其中所述糖蛋白靶点包括抗体。

9.一种包含重组系统的试剂盒，所述重组系统包括：

适于合成糖蛋白靶点的试剂；

能够在重组系统中将真核生物聚糖由原核生物脂质载体分子转移至糖蛋白靶点的分离的原核生物寡糖转移酶；

一种或多种分离的真核生物聚糖，其中各真核生物聚糖均包含GlcNAc₂核并与原核生物脂质载体分子连接，其中所述试剂、所述分离的原核生物寡糖转移酶、所述一种或多种分离的真核生物聚糖和所述重组系统的糖蛋白靶点是无细胞的。

10.一种在重组系统中生产糖基化蛋白的方法，所述方法包括：

提供能够在重组系统中将真核生物聚糖由原核生物脂质载体分子转移至糖蛋白靶点的分离的原核生物寡糖转移酶；

提供一种或多种分离的真核生物聚糖，其中各真核生物聚糖均包含GlcNAc₂核并与原核生物脂质载体分子连接，其中所述试剂、所述分离的原核生物寡糖转移酶、所述一种或多种分离的真核生物聚糖和所述重组系统的糖蛋白靶点是无细胞的；

将所述原核生物寡糖转移酶、所述一种或多种分离的真核生物聚糖和糖蛋白靶点组合以形成无细胞糖基化反应混合物；以及

将所述糖蛋白靶点置于使原核生物寡糖转移酶有效地促使真核生物聚糖由原核生物脂质载体分子转移至所述糖蛋白靶点的一个或多个聚糖接受体残基的条件下以产生糖基化蛋白。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述原核生物寡糖转移酶来源于弯曲杆菌属(Campylobacter)。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述脂质载体分子包括十一碳二烯磷酸酯。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述一种或多种真核生物聚糖进一步包括至少一个甘露糖残基。