[发明专利]一种用于检测微小残留病灶的组合物及试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测BCR/ABL(P210)的引物以及探针，从而建立一种新的超灵敏、检测重复性好的微小残留病检测试剂盒。本发明通过设计针对BCR‑ABL融合基因特异性的引物及探针序列，通过对K562阳性细胞的扩增，其检测灵敏度可以达到10^‑6，具有极高的灵敏度。且对确诊为CML的患者不同治疗时期的融合基因BCR‑ABL的拷贝数进行检测，在不同的治疗时期CR1、CR2、CR3，检测的融合基因的拷贝数和治疗的趋势相一致，且和进口的试剂盒的检测一致。其检测过程简单方便、精密度、准确度和特异性高，得以保证检测结果的正确性。

技术领域

本发明涉及医学分子诊断领域，具体涉及一种检测微小残留白血病灶的 引物、探针及其试剂盒等。

背景技术

白血病是一种常见的恶性血液病，且其发病率近年呈上升趋势，严重危害 人类健康，我国每年死于白血病的患者在3万人以上，近年来，由于化放疗的 进展及造血干细胞移植在临床上的日益广泛应用，急慢性白血病的治疗效果 明显改善，大多数病人可达缓解，长期生存病例越来越多，现已知白血病长期缓 解甚至治愈的关键是如何控制缓解后的复发问题，由于多数白血病缓解后一 段时间进入急性期是由原来的白血病细胞克隆增殖的结果，因此检测微小残 留病(nIimalerdsiualdsiease，MRD)对白血病的疗效评价预后判断和复发监测等 都有十分重要的意义。

MRD是指白血病患者经过治疗达到完全缓解(包括骨髓移植治疗)后体 内残存少量的白血病细胞的状态。临床上只要将白血病细胞总数控制在105 个以下，即骨髓中原始或幼稚肿瘤细胞在5％以下，患者的病情即可完全控制而 达到临床完全缓解状态(称为CR)，但恶性克隆增殖的潜力可存在于此5％以 下的白血病细胞中，微小残留白血病和临床白血病之间没有固定的界限，这主 要取决于检测方法的敏感性。因此，MRD的存在是导致白血病缓解后复发急 性加重以及影响患者长期存活的主要因素。提高残留白血病细胞检测技术的 水平的重要意义在于：(1)指导白血病化疗，根据体内白血病细胞的负荷决定是 继续治疗还是停止治疗；(2)在新的水平上选择最适宜的治疗方法；(3)更早地发 现药物的耐药；)更早地预测白血病复发；(5)评价自身骨髓移植的净化效果；(6) 为体内残留白血病细胞分布和增生动力学的研究提供可能性，所以，为了更深 入客观的评价白血病的治疗效果，判断预后，调整缓解后治疗方案，改善疗效，预 防复发，急慢性白血病MRD的研究成为近年来突出而重要的问题。