[发明专利]一种前脂肪细胞的分离方法

说明书

本发明涉及一种前脂肪细胞的分离方法，具体地，本发明提供一种前脂肪细胞的制备方法，所述的方法包括步骤：(1)将脂肪与Ⅰ型胶原酶溶液混合后进行孵育消化，得到消化液；(2)所述的消化液经中和液中和后，过滤，得到滤液；(3)所述滤液经离心后，收集沉淀，得到前脂肪细胞。本发明所述的方法制备的前脂肪细胞活性强，体外培养的生长曲线类似S型，符合体外培养细胞的正常生长增殖规律，经连续传代后，染色体倍性正常，保留正常细胞的基本遗传特征，且经诱导分化后具有优异的体外成脂能力。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种前脂肪细胞的分离方法。

背景技术

脂肪细胞是由起源于中胚层的多能性间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)逐步分化、发育而来，其分化发育过程大致为：①MSC向脂肪细胞定向分化，形成脂肪母细胞(adipoblast)；②脂肪母细胞途经生长抑制和细胞增殖，形成前脂肪细胞(preadipocyte)；③前脂肪细胞经过生长抑制、细胞增殖和一系列基因表达的变化，形成多室脂肪细胞(multilocular cell)，内含大量小脂滴；④多室脂肪细胞随着脂类在细胞中的沉积，小脂滴逐渐汇集成大脂滴并充满脂肪细胞的大部分，形成单室脂肪细胞(unilocularcell)，便是成熟的脂肪细胞。

前脂肪细胞(Preadipocytes)经诱导后能在胞浆内聚积脂滴而分化为成熟的脂肪细胞。前脂肪细胞不仅能够用于研究脂肪发育和脂肪沉积的机制，还可以应用于人类医学领域的整形科的技术开发，例如前脂肪细胞用于脂肪组织的获取与纯化后，用于美容。

现有技术中，常常从脂肪组织中提取前脂肪细胞，然而，现有的前脂肪细胞提取方法存在许多缺点，例如，提取获得的前脂肪细胞活性差，体外生长慢，不符合体外培养细胞的正常生长增殖规律，经过连续传代后，染色体倍性异常，难以保留正常细胞的基本遗传特征，经诱导分化后成脂能力差等。因此，如何开发一种具有活性强，经过传代培养后保留正常细胞的基本遗传特征和诱导成脂能力的前脂肪细胞制备方法成为当今研究的热点。

因此，本领域需要开发一种具有活性强，经过传代培养后保留正常细胞的基本遗传特征和诱导成脂能力的前脂肪细胞制备方法。

发明内容

本发明的目提供一种具有活性强，经过传代培养后保留正常细胞的基本遗传特征和诱导成脂能力的前脂肪细胞制备方法。

本发明第一个方面提供一种前脂肪细胞的制备方法，所述的方法包括步骤：

(1)将脂肪与Ⅰ型胶原酶溶液混合后进行孵育消化，得到消化液；

(2)所述的消化液经中和液中和后，过滤，得到滤液；

(3)所述滤液经离心后，收集沉淀，得到前脂肪细胞。

优选地，所述的前脂肪细胞选自下组：肌内前脂肪细胞、皮下前脂肪、内脏前脂肪细胞，或其组合。

优选地，所述的步骤(1)中，所述的脂肪来源人或非人哺乳动物。

优选地，所述的非人哺乳动物为牛、羊、狗、猪、马、兔或猫。

优选地，所述的步骤(1)中，所述的脂肪选自下组：肌内脂肪、皮下脂肪、内脏脂肪，或其组合。

优选地，所述的步骤(1)中，所述的脂肪包括粉碎(或剪碎)后的脂肪。

另一优选例中，所述粉碎后的脂肪包括脂肪块。

优选地，所述脂肪块大小为0.2-2mm³，较佳地0.5-1.5mm³，较佳地0.8-1.2mm³，较佳地1mm³。

优选地，所述的步骤(1)中，所述的脂肪与所述Ⅰ型胶原酶溶液的重量比为0.5-1.5:0.5-1.5，较佳地0.8-1.2:0.8-1.2，更佳地1:1。