[发明专利]一种交联琼脂糖亲和介质及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种交联琼脂糖亲和介质在纯化酶或在酶催化产胞苷酸中的应用，其特征在于，所述交联琼脂糖亲和介质的制备方法包括如下步骤：

(1)将含琼脂糖的分散相与含乳化剂的连续相于微通道反应装置中于65-70℃反应，所得反应液于收集液中固化，得到琼脂糖微球；

所述分散相为琼脂糖与水按照质量比为1：15-20组成的混合物；所述连续相为乳化剂与环己烷按照体积比为1-2：3-6组成的混合物；所述分散相和连续相的流速分别为8μL/min，50μL/min，或12μL/min，55μL/min；

(2)将步骤(1)所得琼脂糖微球依次经如下步骤处理后得到交联琼脂糖亲和介质；

(i)溶胀、活化、多羟基聚合物修饰；

(ii)交联；

(iii)活化、偶联亚氨基二乙酸配基；

(iv)螯合镍离子；

步骤(ii)中，所述交联为将多羟基聚合物修饰的琼脂糖微球先进行一次交联，再进行二次交联；其中，所述一次交联为将多羟基聚合物修饰的琼脂糖微球混合液与丁二醇双缩水甘油醚、环氧氯丙烷、碱溶液和NaBH₄反应，降温，过滤，洗涤，即得一次交联琼脂糖微球；其中，所述二次交联为将一次交联琼脂糖微球于DMSO中与环氧氯丙烷、碱溶液反应，降温，过滤，洗涤，得到二次交联琼脂糖微球；

其中，所述纯化酶为纯化腺苷酸环化酶、尿苷-胞苷激酶或乙酸激酶；

其中，所述酶催化产胞苷酸为尿苷-胞苷激酶和乙酸激酶催化产胞苷酸；所述尿苷-胞苷激酶和乙酸激酶的体积比为15:5。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，交联琼脂糖亲和介质在纯化酶中的应用包括如下步骤：

S1：向含交联琼脂糖亲和介质的层析柱加入粗酶液，混匀吸附，弃去余液；

S2：向步骤S1处理后的层析柱中加入0.01-0.05M咪唑，混匀除杂，弃去吸杂液；重复；

S3：向步骤S2处理后的层析柱中加入0.2-0.5M咪唑，混匀洗脱，收集纯化后的酶液，即得；

步骤S1中，所述粗酶液与交联琼脂糖亲和介质的用量比为3-10mL：0.1-3g；

步骤S3中，所述洗脱的温度为2-6℃。

3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，交联琼脂糖亲和介质在酶催化产胞苷酸中的应用包括如下步骤：

(a)将交联琼脂糖亲和介质、含有6xHis标记酶的粗酶液和缓冲液反应，固液分离，得到固定化的酶；

(b)向步骤(a)所得固定化的酶中加入缓冲液、胞苷和乙酰磷酸，反应，即得胞苷酸；其中，所述胞苷和乙酰磷酸的体积比为1.8：3.2；

步骤(a)中，所述交联琼脂糖亲和介质与含有6xHis标记酶的粗酶液的用量比为0.1-3g：0.1-2mL。