[发明专利]一种基于实时荧光定量PCR技术检测嗜血分枝杆菌的方法及其应用

权利要求书

1.用于鉴定或辅助鉴定嗜血分枝杆菌的引物组，由引物1、引物2和探针组成；

所述引物1为如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；

a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物2为如下a3)或a4)：

a3)序列表中序列2所示的单链DNA分子；

a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；

所述探针为如下a5)或a6)：

a5)序列表中序列3所示的单链DNA分子；

a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述引物1、所述引物2和所述探针的摩尔比为5:5:4。

3.权利要求1或2所述的引物组在如下b1)-b8)中任一种中的应用：

b1)制备鉴定或辅助鉴定待测菌是否为嗜血分枝杆菌的产品；

b2)鉴定或辅助鉴定待测菌是否为嗜血分枝杆菌；

b3)制备诊断或辅助诊断待测者是否感染嗜血分枝杆菌的产品；

b4)诊断或辅助诊断待测者是否感染嗜血分枝杆菌；

b5)制备检测或辅助检测待测样品是否含有嗜血分枝杆菌的产品；

b6)检测或辅助检测待测样品是否含有嗜血分枝杆菌；

b7)制备鉴别或辅助鉴别嗜血分枝杆菌与其它分枝杆菌的产品；

b8)鉴别或辅助鉴别嗜血分枝杆菌与其它分枝杆菌。

4.含有权利要求1或2所述引物组的试剂盒；

所述试剂盒的功能为如下c1)-c4)中任一种：

c1)鉴定或辅助鉴定待测菌是否为嗜血分枝杆菌；

c2)诊断或辅助诊断待测者是否感染嗜血分枝杆菌；

c3)检测或辅助检测待测样品是否含有嗜血分枝杆菌；

c4)鉴别或辅助鉴别嗜血分枝杆菌与其它分枝杆菌。

5.权利要求4所述试剂盒的制备方法，为如下d1)或d2)：

d1)将权利要求1或2所述的引物组中的各条引物分别单独包装；

d2)将权利要求1或2所述的引物组中的各条引物按比例混合在一起。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述d2)中，所述引物组中的所述引物1、所述引物2和所述探针按照摩尔比为5:5:4的比例混合在一起。

7.一种鉴定或辅助鉴定待测菌是否为嗜血分枝杆菌的方法，包括如下步骤：提取待测菌的核酸，以待测菌核酸为模板，采用权利要求1所述的引物组进行实时荧光定量PCR；反应结束后通过扩增曲线和CT值判断待测菌是否为嗜血分枝杆菌：若待测菌有S型扩增曲线且CT值＜35，则待测菌为或候选为嗜血分枝杆菌；否则待测菌不为或候选不为嗜血分枝杆菌。

8.一种诊断或辅助诊断待测者是否感染嗜血分枝杆菌的方法，包括如下步骤：提取待测者的核酸，以待测者核酸为模板，采用权利要求1所述的引物组进行实时荧光定量PCR；反应结束后通过扩增曲线和CT值判断待测者是否感染嗜血分枝杆菌：若待测者有S型扩增曲线且CT值＜35，则待测者感染或候选感染嗜血分枝杆菌；否则待测者未感染或候选未感染嗜血分枝杆菌。

9.一种检测或辅助检测待测样品是否含有嗜血分枝杆菌的方法，包括如下步骤：提取待测样品的核酸，以待测样品核酸为模板，采用权利要求1所述的引物组进行实时荧光定量PCR；反应结束后通过扩增曲线和CT值判断待测样品是否感染嗜血分枝杆菌：若待测样品有S型扩增曲线且CT值＜35，则待测样品含有或候选含有嗜血分枝杆菌；否则待测样品不含有或候选不含有嗜血分枝杆菌。

10.一种鉴别或辅助鉴别嗜血分枝杆菌与其它分枝杆菌的方法，包括如下步骤：提取待测菌的核酸，以待测菌核酸为模板，采用权利要求1所述的引物组进行实时荧光定量PCR；反应结束后通过扩增曲线和CT值判断待测菌为嗜血分枝杆菌还是其它分枝杆菌：若待测菌有S型扩增曲线且CT值＜35，则待测菌为或候选为嗜血分枝杆菌；否则待测菌为或候选为其它分枝杆菌。