[发明专利]一种基于实时荧光定量PCR技术检测嗜血分枝杆菌的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种基于实时荧光定量PCR技术检测嗜血分枝杆菌的方法及其应用。本发明还公开了快速鉴定嗜血分枝杆菌的引物组，该引物组由引物1、引物2和探针组成，其核苷酸序列分别如序列表中的序列1、序列2和序列3所示。本发明基于该引物组成功建立了采用实时荧光定量PCR技术检测嗜血分枝杆菌的方法，该检测方法具有快速、灵敏度高、特异性强的优点，为嗜血分枝杆菌感染患者的尽早诊断与治疗提供了有效的技术手段。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于实时荧光定量PCR技术检测嗜血分枝杆菌的方法及其应用。

背景技术

嗜血分枝杆菌Mycobacterium haemophilum，是一种短杆菌，偶尔略弯曲，或成小绳状，抗酸性强。不为革兰氏染色所染，未见运动性。嗜血分枝杆菌在自然界中普遍存在并且可导致人类的感染，由于此致病菌对培养基的特殊要求(含铁)在体外较难培养，因此在临床诊断中存在诊断难度大的问题。

分子生物学技术已越来越广泛地应用于致病病原体的检测与鉴定。实时荧光定量PCR技术，是在普通PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。qPCR技术具有准确度高，灵敏，特异性强和检测快速的优点，可以实现从临床标本中直接检测出微量病原菌，因而可以作为临床重要的辅助诊断手段。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是建立一种采用实时荧光定量PCR技术检测嗜血分枝杆菌的方法。

为了解决上述技术问题，本发明首先提供了用于鉴定或辅助鉴定嗜血分枝杆菌的引物组。

本发明提供的用于鉴定或辅助鉴定嗜血分枝杆菌的引物组由引物1、引物2和探针组成；

所述引物1为如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；

a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物2为如下a3)或a4)：

a3)序列表中序列2所示的单链DNA分子；

a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；

所述探针为如下a5)或a6)：

a5)序列表中序列3所示的单链DNA分子；

a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子。

上述引物组中，所述引物1、所述引物2和所述探针的摩尔比为5:5:4。

为了解决上述技术问题，本发明又提供了上述引物组的新用途。

本发明提供了上述引物组在如下b1)-b8)中任一种中的应用：

b1)制备鉴定或辅助鉴定待测菌是否为嗜血分枝杆菌的产品；

b2)鉴定或辅助鉴定待测菌是否为嗜血分枝杆菌；

b3)制备诊断或辅助诊断待测者是否感染嗜血分枝杆菌的产品；

b4)诊断或辅助诊断待测者是否感染嗜血分枝杆菌；

b5)制备检测或辅助检测待测样品是否含有嗜血分枝杆菌的产品；

b6)检测或辅助检测待测样品是否含有嗜血分枝杆菌；

b7)制备鉴别或辅助鉴别嗜血分枝杆菌与其它分枝杆菌的产品；

b8)鉴别或辅助鉴别嗜血分枝杆菌与其它分枝杆菌。