[发明专利]一种体外合成藏红花酸的方法有效

专利信息
申请号: 202110523493.7 申请日: 2021-05-13
公开(公告)号: CN113234696B 公开(公告)日: 2023-03-31
发明(设计)人: 元英进;梁楠;肖文海;姚明东;王颖 申请(专利权)人: 天津大学
主分类号: C12N9/02 分类号: C12N9/02;C12N9/06;C12N15/70;C12P7/44;C12R1/19
代理公司: 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 代理人: 刘猛
地址: 300073 天津市*** 国省代码: 天津;12
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摘要:
搜索关键词: 一种 体外 合成 藏红花 方法
【权利要求书】:

1.一种体外合成藏红花酸的方法,其特征在于,包括:

步骤1、构建SEQ ID NO:2所示CsCCD2基因和SEQ ID NO:3所示SynALD基因的表达质粒,转入宿主细胞进行蛋白表达,获得CsCCD2蛋白酶和SynALD蛋白酶;

步骤2、在含有FeSO4、L-抗坏血酸、TCEP、catalase和NAD+的缓冲液中加入玉米黄质和CsCCD2蛋白酶反应,至产物藏红花酸二醛不再增加;

步骤3、完成步骤2后再向缓冲液中添加SynALD蛋白酶反应,至藏红花酸不再增加。

2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述宿主细胞为大肠杆菌细胞。

3.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述缓冲液中含0.2~1 mM FeSO4、0.5~2 mML-抗坏血酸、1~2 mM TCEP、1~3 mg/mL catalase和1~5 mM的 NAD+

4.根据权利要求1或3所述方法,其特征在于,所述缓冲液为HEPES缓冲液。

5.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述表达质粒以pET28a系列质粒为基础质粒进行构建。

6.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述底物玉米黄质由有机溶剂、玉米黄质和Triton X-100组成,所述有机溶剂为乙醇和/或DMSO。

7.根据权利要求1所述方法,其特征在于,通过流加底物玉米黄质进行体外合成藏红花酸。

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