[发明专利]减毒的痘苗病毒的克隆毒株及其使用方法

权利要求书

1.分离的克隆LIVP毒株，其中：

所述克隆毒株的基因组不被修饰成含有含编码非病毒异源蛋白质的开放读框的非病毒异源核酸；

所述克隆毒株与GLV-1h68相比具有降低的毒性，其中GLV-1h68具有SEQ ID NO:9所示核苷酸序列；

所述克隆毒株的基因组不包含SEQ ID NO:10所示核苷酸序列；且

所述分离的克隆毒株通过包括以下步骤的方法产生：

(i)从LIVP病毒样品制备克隆分离株；

(ii)测定所述克隆分离株的毒性；

(iii)测定所述克隆分离株的抗肿瘤发生能力；和

(iv)选择与GLV-1h68相比显示降低的毒性或者更高的抗肿瘤发生能力和降低的毒性二者的克隆分离株。

2.分离的克隆LIVP毒株，其中：

所述克隆毒株的基因组不被修饰成含有含编码非病毒异源蛋白质的开放读框的非病毒异源核酸；和

所述克隆毒株的基因组包含选自如下的核苷酸序列：

a)SEQ ID NO:1的核苷酸2256–181,114、SEQ ID NO:2的核苷酸11,243–182,721、SEQID NO:4的核苷酸6,264–181,390、SEQ ID NO:5的核苷酸7,044–181,820、SEQ ID NO:6的核苷酸6,674–181,409、SEQ ID NO:7的核苷酸6,716–181,367或者SEQ ID NO:8的核苷酸6,899–181,870；和

b)与SEQ ID NO:1的核苷酸2256–181,114、SEQ ID NO:2的核苷酸11,243–182,721、SEQID NO:4的核苷酸6,264–181,390、SEQ ID NO:5的核苷酸7,044–181,820、SEQ ID NO:6的核苷酸6,674–181,409、SEQ ID NO:7的核苷酸6,716–181,367或者SEQ ID NO:8的核苷酸6,899–181,870的序列具有至少99％序列相同性的核苷酸序列，且与GLV-1h68相比，所述克隆毒株具有降低的毒性或者更高的抗肿瘤发生能力和降低的毒性二者，其中GLV-1h68具有SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列。

3.权利要求2的分离的克隆毒株，其中所述克隆毒株的基因组由选自如下的核苷酸序列组成：

a)SEQ ID NO:1的核苷酸1–183,369、SEQ ID NO:2的核苷酸1–193,964、SEQ ID NO:4的核苷酸1–187,653、SEQ ID NO:5的核苷酸1–188,863、SEQ ID NO:6的核苷酸1–188,082、SEQID NO:7的核苷酸1–188,082或者SEQ ID NO:8的核苷酸1–188,768；和

b)与SEQ ID NO:1的核苷酸1–183,369、SEQ ID NO:2的核苷酸1–193,964、SEQ ID NO:4的核苷酸1–187,653、SEQ ID NO:5的核苷酸1–188,863、SEQ ID NO:6的核苷酸1–188,082、SEQ ID NO:7的核苷酸1–188,082或者SEQ ID NO:8的核苷酸1–188,768的序列具有至少99％序列相同性的核苷酸序列。

4.权利要求2的分离的克隆LIVP毒株，其中：

所述克隆毒株的基因组包含SEQ ID NO:1、2、4、5、6、7或8所示核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO:1、2、4、5、6、7或8所示核苷酸序列具有至少99％序列相同性的核苷酸序列。

5.分离的克隆LIVP毒株，其中基因组包含SEQ ID NO:1、2、4、5、6、7和8任一者所示的核苷酸序列。

6.通过繁殖权利要求1-5任一项的分离的克隆LIVP毒株产生的LIVP制备物。

7.细胞培养物或分离的细胞，其包含权利要求1-5任一项的克隆毒株。