[发明专利]蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体多糖在制备免疫抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明公开了蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体多糖在制备免疫抗肿瘤药物中的应用。蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体多糖PHsgII可以显著抑制肝癌细胞的增殖和转移，改善荷瘤小鼠血清中IgA、IgG和IgM水平，影响荷瘤小鼠肿瘤组织中血管生成相关因子、白细胞介素、趋化因子等的表达，具有显著的免疫抗肿瘤活性；蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体多糖为食源性真菌多糖，安全可靠。本发明为蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体多糖PHsgII在免疫抗肿瘤药物中的开发应用提供了理论基础，具有显著的临床应用前景。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces Hepiali)发酵菌丝体多糖在制备免疫抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

肝细胞癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一。2019年国家癌症中心发布的最新一期的全国癌症统计数据显示，2015年我国肝癌新发病例37.0万例，发病率为26.92/10万，中标率为17.64/10万，其发病占全部恶性肿瘤发病的9.42％，位居第四位；死亡率占全部恶性肿瘤死亡的13.94％。肝癌死亡率占比相较发病率占比出现明显提高，是死亡率仅次于肺癌的第二大恶性肿瘤。肝癌不仅危害居民健康，还给家庭、社会和国家带来沉重的经济负担，已成为一个亟待解决的公共卫生问题。

手术、化疗和放疗是目前肝癌治疗的有效手段。手术和放疗属于局部治疗，对于潜在的转移病灶和已经发生临床转移的癌症难以发挥疗效。放疗和化疗过程中不可避免的伴随有毒副作用，如恶心、脱发及肝肾功能损害等。随着科学技术的发展，生物治疗逐渐活跃于科研工作者和大众视野。2018年，James P.Allison与Tasuku Honjo教授因发现抑制免疫负调节的新型癌症治疗方法获得诺贝尔生理学和医学奖。沃伦·阿尔珀特奖获得者陈列平教授根据肿瘤免疫逃逸机制，提出“免疫正常化(Immune normalization)”理论，靶向肿瘤微环境，治疗效果更加有效且毒性更低。这一系列成果充分体现了基于免疫学策略在治疗肿瘤方面取得的重大进展，也预示着肿瘤免疫生物治疗的巨大前景。

真菌多糖是真菌子实体及发酵菌丝体中重要的活性成分，具有抗氧化、提高免疫力等多种功效。在过去的两个世纪，真菌多糖制品已经被广泛应用于卫生保健系统，其常与放、化疗和生物治疗联合使用，协同调节机体免疫功能，抑制肿瘤发生与发展。因此，科研工作者期望能够以此为契机发现更加安全有效的抗肝癌药物，与现有治疗药物形成补充，为提高癌症病人生存期和生活质量提供一种新的可能，具有重要的社会和经济意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体多糖在制备免疫抗肿瘤药物中的应用。蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体多糖能够有效抑制肝癌细胞的增殖和转移，调节荷瘤小鼠血清中IgA、IgG和IgM水平，影响肿瘤组织中血管生成相关因子、白细胞介素、趋化因子等的表达，具有显著的免疫抗肿瘤活性。

本发明采用的技术方案是：蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体多糖在制备免疫抗肿瘤药物中的应用。

优选的，所述蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体多糖的制备方法包括如下步骤：取蝙蝠蛾拟青霉菌粉，在80℃的双蒸水中提取4小时，离心获得上清液，浓缩后，用三氯乙酸法除蛋白，之后采用90％乙醇沉淀过夜，收集析出物；将析出物溶于超纯水中，大孔树脂除盐后，采用DEAE-52离子交换层析纯化，分别用超纯水和0.5mol/l NaCl溶液进行洗脱，收集NaCl洗脱峰，透析除盐，减压浓缩后，冷冻干燥，所得产物进一步采用G-100凝胶柱层析纯化，超纯水洗脱，收集洗脱峰Ⅱ，减压浓缩，冷冻干燥，得蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体多糖(PHsgII)。

进一步的，所述蝙蝠蛾拟青霉菌粉的制备方法，包括如下步骤：将保藏号为CCTCCNO：M 2014670的蝙蝠蛾拟青霉菌株PH40，采用液体培养基进行发酵培养，收集发酵菌丝体，采用冻干机冻干后，得蝙蝠蛾拟青霉菌粉。

进一步的，所述液体培养基的组成为：蔗糖25g/L，酵母浸粉20g/L，蛋白胨10g/L，磷酸二氢钾0.25g/L，硫酸镁0.25g/L，维生素B1 0.01g/L，氯化锌0.003g/L，水余量。