[发明专利]一种支原体疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供一种支原体疫苗及其制备方法，属于医药技术领域。一种支原体疫苗，是以支原体膜为抗原，以免疫细胞膜为载体材料，采用DSPE‑PEG2000修饰的粒径为50‑500 nm的支原体疫苗。本发明还提供所述疫苗的制备方法，包括如下步骤：（1）分别制备支原体膜和免疫细胞膜；（2）将所述支原体膜和免疫细胞膜混合，得到混合膜悬浮液；将所述混合膜悬浮液与DSPE‑PEG2000水溶液混合均匀，使用脂质体挤出仪挤压过膜，得到所述疫苗。本发明膜融合支原体疫苗，是灭活疫苗，不仅能够有效预防支原体感染，而且安全性高。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种支原体疫苗及其制备方法。

背景技术

支原体是引起人和动物肺炎的常见病原。目前，尚无针对人肺炎支原体的商品化疫苗，仅有部分灭活疫苗进入临床试验，其预防肺炎的效果约为40％。减毒活疫苗或灭活疫苗被广泛用于控制猪肺炎支原体感染。与活疫苗相比，灭活疫苗更安全，但由于处理过程中的蛋白变性和降解等因素，免疫效果较弱，因此需要开发更安全有效的预防支原体感染的疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种膜融合支原体疫苗，是灭活疫苗，不仅能够有效预防支原体感染，而且安全性高。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种支原体疫苗，是以支原体膜为抗原，以免疫细胞膜为载体材料，采用DSPE-PEG2000修饰的粒径为50-500nm的支原体疫苗。

在本发明中，所述支原体膜为人和动物支原体细胞膜，所述免疫细胞膜为巨噬细胞膜。

在本发明中，所述巨噬细胞膜是采用干扰素γ诱导后的巨噬细胞膜。

本发明还提供所述疫苗的制备方法，包括如下步骤：

(1)分别制备支原体膜和免疫细胞膜；

(2)将所述支原体膜和免疫细胞膜混合，得到混合膜悬浮液；将所述混合膜悬浮液与DSPE-PEG2000水溶液混合均匀，使用脂质体挤出仪挤压过膜，得到所述疫苗。

在本发明中，所述支原体膜和免疫细胞膜分别采用如下方法制备：将支原体或免疫细胞用PMSF水溶液重悬，在冰水浴中孵育，冻融，然后离心，收集支原体膜或免疫细胞膜。

在本发明中，免疫细胞膜来源于干扰素γ诱导培养的巨噬细胞。

在本发明中，所述干扰素γ诱导培养的浓度为20-50ng/ml，诱导培养时间为20-28小时。

在本发明中，所述混合膜液中支原体膜和免疫细胞膜的质量比为1:0.1-2；DSPE-PEG2000水溶液与混合膜悬浮液的体积比为1:8-10，所述DSPE-PEG2000水溶液的浓度为4-6mg/ml；

在本发明中，所述混合膜液中支原体膜和免疫细胞膜的浓度分别为1-3mg/ml。