[发明专利]L-天冬酰胺酶SaLA及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了L‑天冬酰胺酶SaLA及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，是一种L‑天冬酰胺酶，命名为SaLA蛋白，是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明还保护SaLA蛋白作为L‑天冬酰胺酶的应用。本发明对于相关医疗领域、食品加工领域等，具有重大的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉L-天冬酰胺酶SaLA及其编码基因和应用。

背景技术

L-天冬酰胺酶能够催化L-天冬酰胺水解为L-天冬氨酸和氨。在医疗领域，微生物来源的L-天冬酰胺酶可用作抗肿瘤剂和抗白血病剂，如治疗淋巴恶性肿瘤、急性淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤，但它们的治疗利用受到超敏反应及其它毒副作用的影响。另外，在食品领域，人们在炸薯条等油炸和烘烤类的淀粉食品中检出丙烯酰胺，而丙烯酰胺是一种神经毒素，并于2017年被世界卫生组织国际癌症研究机构列为致癌物。研究表明，L-天冬酰胺酶能有效去除丙烯酰胺的重要前体(L-天冬酰胺)，从而大幅度降低油炸和烘烤类食品中丙烯酰胺的最终含量。因此，L-天冬酰胺酶在食品领域同样具有重要的应用前景。

到目前为止，人们可选用的商品L-天冬酰胺酶的种类很少，因为已报道的L-天冬酰胺酶大多都存在一些缺点，如活性低、稳定性较差、能够保持活性的温度/pH范围较窄等。这些缺点限制了L-天冬酰胺酶在医药和食品中的广泛应用。因此，需要继续寻找性质新颖的L-天冬酰胺酶及其新的来源，已满足该酶的应用需要。本发明提供了新颖来源的L-天冬酰胺酶SaLA及其编码基因和应用。

发明内容

本发明的目的是提供L-天冬酰胺酶SaLA及其编码基因和应用。

本发明提供的蛋白质，来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，是一种L-天冬酰胺酶，命名为SaLA蛋白，氨基酸序列由序列表中序列1所示。由于氨基酸序列的特殊性，任何含有序列表中序列1所示氨基酸序列的肽蛋白的片段或其突变体，只要其与前述氨基酸序列具有99％以上同源性，且具有L-天冬酰胺酶功能，均属于本发明保护范围。具体的，所述改变包括氨基酸序列中一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加和/或替换。

SaLA蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围。

优选的，所述基因的碱基序列如序列表中序列2所示，该基因序列来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，由978个碱基组成。由于核苷酸序列的特殊性，任何序列表中序列2所示多核苷酸的变体，只要其与该多核苷酸具有90％以上同源性，均属于本发明保护范围之列。所述多核苷酸的变体是指一种具有一个或多个核苷酸改变的多核苷酸序列。此多核苷酸的变体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。

含有所述基因的重组表达载体、表达盒或重组微生物均属于本发明的保护范围。

本发明还保护SaLA蛋白作为L-天冬酰胺酶的应用。应用SaLA蛋白作为L-天冬酰胺酶时，采用的温度为20-90℃，采用的pH为3-11。应用SaLA蛋白作为L-天冬酰胺酶时，采用的温度为50℃，采用的pH为8。

本发明还保护L-天冬酰胺酶用于抑制炸薯条中的丙烯酰胺中的应用。所述的应用将原料浸泡在浓度为12U/mL的L-天冬酰胺酶溶液中，其物料比为1:2-1:3，浸泡温度50℃，时间20min。

本发明提供的L-天冬酰胺酶具有较高的酶活力，宽泛的底物，并且反应温度宽泛，反应pH宽泛，并对金属离子具有高耐受性。

盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)已于2020年7月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国，武汉，武汉大学；邮编：430072)，保藏编号为CCTCC NO:M 2020375。

本发明对于相关医疗领域、食品工业领域等，具有重大的应用前景。

附图说明