[发明专利]一种水蛭药材、饮片及炮制品的体外生物活性测定方法

权利要求书

1.一种水蛭药材、饮片及炮制品的体外生物活性测定方法，其特征在于，具体测定步骤为：

（1）供试品溶液的制备：取水蛭，粉碎过三号筛，称取2.5g，精密称定，加入水20ml，称定重量，85℃加热15分钟，冷却至40℃，用稀盐酸调节pH为2.0，加入酶底比1%的胃蛋白酶，40℃酶解1小时，用20%氢氧化钠溶液调节pH为8.0，加入酶底比1%的胰蛋白酶，40℃酶解3小时，加稀盐酸调节pH至近中性，85℃加热15分钟，待冷至室温，高速离心，上清液置25ml量瓶中，沉淀再加水5ml洗涤，高速离心，上清液并入量瓶中，加水至刻度，混匀，滤过，即得；

（2）测定法：精密量取供试品溶液100μl，置试管中，加入含有0.5%纤维蛋白原（以固形物计）的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液200μl，摇匀，置37℃水浴中温浸5分钟，滴加每1ml中含10单位的凝血酶溶液（每4分钟滴加1次，每次2μl，边滴加边轻轻摇匀）至凝固，记录消耗凝血酶溶液体积，按下式计算抗凝血酶活力：

U=C₁V₁/（C₂V₂）

式中：U——每1g水蛭含抗凝血酶活性单位，U/g；

C₁——凝血酶溶液的浓度，U/ml；

C₂——供试品溶液的浓度，g/ml；

V₁——消耗凝血酶溶液的体积，μl；

V₁——供试品溶液的加入量，μl。

2.根据权利要求1所述的水蛭药材、饮片及炮制品的体外生物活性测定方法，其特征在于所用胃蛋白酶酶活力为1:15000，胰蛋白酶酶活力为2500U/mg。