[发明专利]促使iPSC分化为中枢神经干细胞的方法及培养基和系统

权利要求书

1.一种促使诱导多能干细胞分化为中枢神经干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：诱导多能干细胞的培养；

包括原代培养和传代培养，所述原代培养和所述传代培养中所用的细胞培养器皿均经过玻连蛋白处理；

S2：诱导多能干细胞分化为中枢神经干细胞；

开始分化前，将诱导多能干细胞接种在经过重组层粘连蛋白处理的细胞培养器皿中，使用低动物源性中枢神经诱导培养基或无动物源性中枢神经诱导培养基进行培养，更换培养基，培养8～10天，以胰酶替代物对诱导多能干细胞分化后得到的中枢神经干细胞进行处理，收集中枢神经干细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中所述原代培养和/或所述传代培养中诱导多能干细胞的接种密度为1.0～2.5×10⁴个/cm²，优选为1.5×10⁴个/cm²。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中所述诱导多能干细胞的接种密度为1.5～3.5×10⁴个/cm²，优选为2.5×10⁴个/cm²。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中所述低动物源性中枢神经诱导培养基包括以下成分：DMEM/F12培养基、非必需氨基酸、B27、胰岛素、全铁转铁蛋白、黄体酮、腐胺、LDN193189、SB431542、XAV-939。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中所述无动物源性中枢神经诱导培养基包括以下成分：DMEM/F12培养基、非必需氨基酸、胰岛素、全铁转铁蛋白、腐胺、人血白蛋白、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、黄体酮、视网醇、维生素A、dl-α-生育酚乙酸酯、维生素E、亚油酸、α-亚麻酸、硫辛酸、LDN193189、SB431542、XAV-939。

6.一种促使诱导多能干细胞分化为中枢神经干细胞的低动物源性中枢神经诱导培养基，其特征在于，包括以下成分：DMEM/F12培养基、非必需氨基酸、B27、胰岛素、全铁转铁蛋白、黄体酮、腐胺、LDN193189、SB431542。

7.根据权利要求6所述的培养基，其特征在于，所述非必需氨基酸的含量为0.1～5％，所述含量为体积比；所述B27的含量为0.5～1％，所述含量为体积比；所述胰岛素的浓度为0.05～5μg/mL；所述全铁转铁蛋白的浓度为1～50μg/mL；所述黄体酮的浓度为0.5～5ng/mL；所述腐胺的浓度为2～100μg/mL；所述LDN193189的浓度为10～100ng/mL；所述SB431542的浓度为1～10μg/mL。

8.一种促使诱导多能干细胞分化为中枢神经干细胞的低动物源性中枢神经诱导培养基，其特征在于，包括以下成分：DMEM/F12培养基、非必需氨基酸、B27、胰岛素、全铁转铁蛋白、黄体酮、腐胺、LDN193189、SB431542、XAV-939。

9.根据权利要求8所述的培养基，其特征在于，所述非必需氨基酸的含量为0.1～5％，所述含量为体积比；所述B27的含量为0.5～1％，所述含量为体积比；所述胰岛素的浓度为0.05～5μg/mL；所述全铁转铁蛋白的浓度为1～50μg/mL；所述黄体酮的浓度为0.5～5ng/mL；所述腐胺的浓度为2～100μg/mL；所述LDN193189的浓度为5～100ng/mL；所述SB431542的浓度为0.5～10μg/mL；所述XAV-939的浓度为0.1～2μg/mL。