[发明专利]一种鉴别梅花鹿或马鹿鹿茸鹿角的特征多肽及其应用

权利要求书

1.一种鉴别梅花鹿或马鹿鹿茸鹿角的特征多肽，其特征在于，所述特征多肽具体为：肽段1如SEQ ID No.1所示：KAPQVSTPTLVELSR；肽段2如SEQ ID No.2所示：HHGGEFTVVLQADFQK。

2.根据权利要求1所述的特征多肽，其特征在于，所述SEQ ID No.1肽段1的质荷比为542.65；所述SEQ ID No.2肽段2的质荷比为604.97。

3.一种用于鉴别梅花鹿或马鹿鹿茸鹿角的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含权利要求1或2所述的特征多肽。

4.一种鉴别梅花鹿或马鹿鹿茸鹿角的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对待测样品进行前处理，得待检测溶液；

（2）将待检测溶液通过液相-三重四级杆质谱法进行检测，分析对比待检测溶液中的质谱结果同肽段1、肽段2的质谱图，当质谱图中出现肽段1或肽段2的质谱图时，可判断待测样品为梅花鹿或马鹿。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述待测样品的前处理具体过程为：样品粉碎，过筛，称取样品粉末10mg，加入5ml变性缓冲液，和1ml DTT溶液，摇匀，置80℃处理过夜，取出放冷至室温，离心，量取上清液500μL，加入100μL IAA溶液，避光反应30min，混匀，离心；对样品溶液脱盐后，量取上清液100μL，加入900μL碳酸氢铵溶液（1%）和5μL牛胰蛋白酶溶液，37℃酶解4h，取出放冷至室温，离心，取上清液，即得。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述变性缓冲液具体制备过程为：称取573.1g 盐酸胍，121.1g 三羟甲基氨基甲烷，0.734g乙二胺四乙酸，加水溶解，加浓盐酸调pH至8.0，加水稀释至1L，摇匀，即得；所述DTT溶液的浓度为0.5M；所述IAA溶液的浓度为0.55M。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述牛胰蛋白酶溶液的具体制备过程为：液称取牛胰蛋白酶适量，用乙酸溶液溶解，制成浓度为10mg/ml的溶液，临用现配；所述乙酸溶液的浓度为2%。

8.根据权利要求4-7任一项所述的方法，其特征在于，所述液相-三重四级杆质谱法中，液相条件为：色谱柱为ACQUITY UPLC® BEH C18 (2.1×50mm，1.7μm)，柱温43℃，流速0.3mL/min，流动相A为0.1%甲酸溶液，B为0.1%甲酸乙腈溶液，进行梯度洗脱。

9.根据权利要求8所述的方法，所述梯度洗脱的条件为：0～9min,3%B→7.5%B；9～13min, 7.5%B→25%B；13～14min,25%B→90%B；14～17min, 90%B；17～17.5min, 10%B-97%B；17.5～21min,97%B，进样量为5μm。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述液相-三重四级杆质谱法中，质谱条件：采用质谱检测器，电喷雾离子化（ESI），正离子模式下，进行多反应监测；鞘气流速46L/hr；辅助气流速850 L/hr；喷雾电压3.5KV；离子源温度150℃；辅助气温度400℃；锥孔电压30V，碰撞电压35V)；溶剂延迟（solvent delay）为0～8min和14～20min；选择m/z（三电荷）542.65→226.12、542.65→375.24作为检测离子对。