[发明专利]一种新型布鲁氏菌抗体检测方法

说明书

本发明属于布鲁氏菌抗体检测技术领域，尤其为一种新型布鲁氏菌抗体检测方法，该检测方法是利用胶体金和乳胶微球桥连布病抗体，颗粒大小发生变化，然后通过分光光度计检测最大吸收、散射光波长变化来鉴定布病感染情况的一种技术。本发明通过胶体金和乳胶微球分别标记布鲁氏菌外膜蛋白，二者通过捕获布鲁氏菌病抗体形成“交连桥”，在凝集实验基础上，采用胶体金加乳胶微微球捕获布病抗体凝集原理，结合分光光度计法测试结果，大大提高了检测灵敏度，3～5分钟即可出结果，灵敏度高，判读客观，操作简单，便于基层人员检测使用。

技术领域

本发明涉及布鲁氏菌抗体检测技术领域，具体为一种新型布鲁氏菌抗体检测方法。

背景技术

布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌引起的人畜共患病，多发生于家畜中的羊、牛、猪中，引起高热、流产等症状，阳性病畜暴露人群具有高度感染风险。世界卫生组织OIE曾将其列为B类动物疫病，我国将该病列为二类动物疫病。

布鲁氏菌病常用的检测方法有虎红平板凝集试验、ELISA检测方法、细菌PCR检测方法等。而这些方法如ELISA方法、PCR检测方法存在对实验操作人员技术要求较高，检测周期长，试剂设备昂贵；虎红平板凝集试验检测灵敏度不高，特异性不强，肉眼判读，结果差异大等问题，不利于基层大量推广使用。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种新型布鲁氏菌抗体检测方法，解决了ELISA方法、PCR检测方法存在对实验操作人员技术要求较高，检测周期长，试剂设备昂贵；虎红平板凝集试验检测灵敏度不高，特异性不强，肉眼判读，结果差异大等问题，不利于基层大量推广使用的问题。

(二)技术方案。

本发明为了实现上述目的具体采用以下技术方案：

一种新型布鲁氏菌抗体检测方法，包括：分别包被有布鲁氏菌外膜蛋白OMP22、OMP25、OMP28的胶体金和乳胶微球、血清/血浆样本检测缓冲液、分光光度计。

进一步地，所述布鲁氏菌外膜蛋白OMP22、OMP25、OMP28通过原核表达，破碎、提取、纯化获得。

进一步地，所述胶体金为40nm大小的胶体金溶液。

进一步地，所述乳胶微球为外购含-COOH，颗粒大小3μm的红色乳胶微球。

进一步地，所述血清/血浆样本检测缓冲液为10mMpH7.4的磷酸盐缓冲液。

进一步地，所述分光光度计要求波长在380～780nm之间有良好的精密度和准确。

(三)有益效果

与现有技术相比，本发明提供了一种新型布鲁氏菌抗体检测方法，具备以下有益效果：

本发明，在凝集实验基础上，采用胶体金加乳胶微微球捕获布病抗体凝集原理，结合分光光度计法测试结果，大大提高了检测灵敏度，3～5分钟即可出结果，灵敏度高，判读客观，操作简单，便于基层人员检测使用。

附图说明

图1为本发明布鲁氏菌蛋白抗原标记胶体金颗粒通过布病阳性样本中的抗体与乳胶微球形成桥连结构示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本发明一个实施例提出的一种新型布鲁氏菌抗体检测方法，布鲁氏菌外膜蛋白OMP22、OMP25、OMP28的制备方法包括以下步骤：