[发明专利]一种筛选幽门螺杆菌脲酶抑制剂的方法

说明书

本发明公开了一种利用HPUb/nPt/NPG/GCE生物传感器筛选幽门螺杆菌脲酶抑制剂的方法，步骤包括1)HPUb/nPt/NPG/GCE生物传感器的制备及表征；2)以HPUb/nPt/NPG/GCE生物传感器检测0～100mM梯度浓度尿素产生的响应电流，根据米氏方程计算得到该生物传感器检测尿素的K_a，尿素和V_max，尿素；3)检测不同脲酶抑制剂筛选分析各个抑制剂的抑制类型和抑制常数。本发明方法中开发的HPUb/nPt/NPG/GCE生物传感器制备过程简单，检测稳定性高，易于存放，同时本发明提供的筛选方法与其他检测方法相比，不需要复杂的样品前处理过程，且操作简单，检测迅速，有效缩短了潜在的脲酶抑制剂筛选时间，应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及一种筛选幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)脲酶抑制剂的方法，尤其涉及一种利用H.pylori脲酶b亚基(H.pylori 26695urease b subunit，HPUb)/纳米铂(Nano platinum，nPt)/纳米多孔金(Nanoporous gold，NPG)/玻碳电极(Glassy carbon electrode，GCE)生物传感器筛选幽门螺杆菌脲酶抑制剂的方法。属于电化学分析测试领域。

背景技术

幽门螺杆菌(H.pylori)是一种选择性地定殖在人胃黏膜上皮细胞表面和胃粘液底层的革兰氏阴性微需氧细菌。众所周知，H.pylori与慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤和胃腺癌的发生有关。尽管基于抗生素、质子泵抑制剂和铋剂的联合疗法仍有效，但是随着耐药性以惊人的速度增加，这些传统疗法对H.pylori的根除率在全世界范围内不断下降。因此，需要寻找新的治疗靶点并开发潜在的治疗药物。

H.pylori能够在胃的恶劣环境中存活主要依赖于其独特的适应性机制，其中最重要的是具有强大活性的毒力因子脲酶。脲酶不仅是H.pylori存活和初始定植的关键，而且是维持慢性感染所必需的。作为开发新药的策略，脲酶抑制已被证明是有前途的。然而，目前脲酶抑制剂筛选试验主要基于植物脲酶，但植物和H.pylori脲酶的性质差异阻碍了这些努力。因此，迄今为止，只有乙酰氧肟酸(acetohydroxamic acid，AHA)被开发用于在临床上抑制H.pylori脲酶活性。不幸的是，AHA在多数患者身上表现出的明显的严重副作用限制了它的应用发展。此外，现有的筛选方法几乎都是基于细菌培养和苯酚-次氯酸盐比色法。这些方法还不能满足快速药物筛选的需求。因此，亟需开发更加高效快速的H.pylori脲酶抑制剂筛选技术。生物传感器作为一种兼具生物、化学、电学等多学科的技术，具有快速、准确、高灵敏度和低检测限等优点。然而，目前脲酶相关的生物传感器都是用于尿素、重金属离子和农药的检测。基于生物传感器技术筛选幽门螺杆菌脲酶抑制剂的研究及其专业方法仍是空白。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种利用HPUb/nPt/NPG/GCE生物传感器筛选幽门螺杆菌(H.pylori)脲酶抑制剂的方法。