[发明专利]一种检测中和抗体的方法

说明书

本发明公开了一种检测中和抗体的方法。所述的方法包括如下步骤：(1)将病原微生物受体结合域抗原修饰的编码磁珠与生物素标记的病原微生物受体以及待测样品进行混合、孵育，得孵育产物1；(2)将所述孵育产物1与链霉亲和素‑荧光染料混合、孵育，得孵育产物2；(3)清洗所述孵育产物2并进行荧光强度分析、根据标准曲线计算待测样品中中和抗体的浓度。本发明能够实现多靶标检测，大大缩短了孵育时间且能够同时评估多种疫苗对于变异病毒的阻断抑制效果。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种检测中和抗体的方法。

背景技术

疫苗是预防细菌病毒感染的重要手段之一。中和抗体是一种人体免疫系统产生，能够阻碍入侵的细菌或病毒感染人体。因此，测量体内中和抗体的效果是评估疫苗接种后有效性的主要方法。中和抗体的主要检测方法是利用抗原抗体的特异性结合和阻断感染的原理，通过显色反应或荧光强弱的变化来测量中和抗体浓度的高低。酶联免疫吸附剂测定(ELISA)是中和抗体检测的常用方法之一，具有很好的灵敏度和检测稳定性，搭配自动化仪器也能实现高通量样本检测。但是对于大量样本的筛查工作，单孔单样本的检测方法限制了检测的灵活性和检测通量。

现有的ELISA方法利用病毒蛋白-受体蛋白之间的相互作用，模拟活细胞感染病毒，通过显色反应来判断结果。当人体被2019-nCoV感染未产生中和抗体时，酶标记的RBD蛋白片段就会与受体蛋白ACE-2相结合，如果机体被2019-nCoV感染产生中和抗体时，就会阻断RBD蛋白片段与受体蛋白ACE-2相结合，从而导致显色减弱，与中和抗体有无呈负相关，通过校准品曲线可计算中和抗体的浓度。然而现有的ELISA方法有诸多缺陷：1)在一个反应孔内对单靶标进行检测，不能对多靶标同时检测；2)在一个反应孔内只能检测一个患者样本，不能对多个患者样本同时检测；3)现有ELISA方法的检测时间较长，由于孵育步骤较多，总体时间通常要2h以上(例如：加待检测样10分钟、孵育30min、洗涤10min、加标记抗体，孵育30min、洗涤10min、加染料孵育30min、洗涤10min，放机器里读数)；4)现有ELISA方法只能验证患者体内中和抗体对一种病毒阻断抑制效果，无法同时评估突变类型的阻断效果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为克服现有技术中抗体进行检测时存在的效率低下的缺陷，提供一种利用编码磁珠特别是数字编码磁珠对多样本中和抗体同时检测的方法。通过编码的磁珠也能对多靶标的中和抗体进行检测，大大的提高了检测的灵活性和检测通量，对于大样本的筛查有很大帮助。

本发明主要通过以下技术方案解决上述技术问题。

本发明提供一种检测待测样品中病原微生物中和抗体的方法，所述的方法包括如下步骤：

(1)将病原微生物受体结合域抗原修饰的编码磁珠与生物素标记的病原微生物受体以及待测样品进行混合、孵育，得孵育产物1；

(2)将所述孵育产物1与链霉亲和素-荧光染料混合、孵育，得孵育产物2；

(3)清洗所述孵育产物2并进行荧光强度分析、根据标准曲线计算待测样品中中和抗体的浓度。

步骤(1)中所述生物素标记的病原微生物受体的使用浓度较佳地为0.1μg/mL～100μg/mL。

步骤(1)中所述孵育的时间较佳地为1min～60min，优选20min。

步骤(1)中所述病原微生物受体结合域抗原较佳地为新冠受体结合域抗原。

步骤(2)中所述链霉亲和素-荧光染料的用量优选依据步骤(1)中所述生物素标记的病原微生物受体的用量而定，所述生物素标记的病原微生物受体和所述链霉亲和素-荧光染料的质量比较佳地为5:6；

步骤(2)中所述孵育的时间较佳地为20min。