[发明专利]一种大肠杆菌浓度检测方法及其系统

权利要求书

1.一种大肠杆菌浓度检测方法，所述检测方法采用了定量比色分析装置进行检测，其特征在于，所述定量比色分析装置设有图像处理装置和观测装置；

所述图像处理装置用于获取观测装置内的待测图像、根据比色拟合曲线对待测溶液进行预测得到大肠杆菌预测浓度值；

所述图像处理装置设有处理器、显示器以及摄像装置，处理器分别与显示器、摄像装置连接；摄像装置用于拍摄观测装置内的待测图像；

所述处理器用于将待测溶液依次进行图像旋转与裁剪、ROI区域裁剪、色彩平衡、颜色阈值处理、数据测量分析，得到离散待测样品像素颜色面积，根据离散待测样品像素颜色面积在比色拟合曲线的位置得到大肠杆菌预测浓度值；

所述显示器用于显示观测图像以及大肠杆菌预测浓度值；

所述观测装置用于放置待测溶液、观测待测溶液；

所述观测装置包括底座、与底座活动连接的样品支架、与样品支架固定连接的置物板、与底座进行可拆卸连接的容纳腔室、设置在容纳腔室内的光源基座、与光源基座固定连接的聚光透镜、与容纳腔室可拆卸连接的顶盖、固定设置在顶盖处的LED光源部件以及设置在顶盖的适配夹持装置；

所述置物板用于存放待测溶液和比色标准组溶液；

所述容纳腔室为黑色，容纳腔室在内部两侧边分别设置安装槽口，所述安装槽口用于与光源基座进行可嵌入连接；

在容纳腔室内，两侧的LED光源部件分别与对应的聚光透镜处于相同垂直面，使得透过聚光透镜后在置物板上形成光照均匀区域；

所述光照均匀区域在容纳腔室底部所在水平面的长度与聚光透镜距离光照均匀区域的高度相等，两侧的LED光源部件经过聚光透镜后分别与光照均匀区域的边缘部形成的入射夹角相等且均为45°；

检测方法包括以下步骤：

比色标准组溶液配置步骤：将多组大肠杆菌悬浮液分别与第一L-Trp溶液混合，形成多组第一标准混合溶液；

所述多组大肠杆菌悬浮液分别为基于Tris-HCl缓冲体系的不同浓度的大肠杆菌配置溶液，所述多组大肠杆菌悬浮液采用Tris-HCl缓冲液，Tris-HCl缓冲液pH值为9.0，浓度为20mM，第一L-Trp溶液的浓度采用40μg/mL；

将多组第一标准混合溶液放置在黑暗环境下，并在第一预设转速、第一预设温度下振荡培养至第一预设时间后，分别加入第一对二甲氨基苯甲醛溶液形成多组第二标准混合溶液，根据第二预设时间进行振荡得到比色标准组溶液，所述第一对二甲氨基苯甲醛溶液的浓度为10mg/mL，第一对二甲氨基苯甲醛溶液中的稀盐酸比例为10％；

待测样品预处理步骤：将待测样品原溶液分别与第二L-Trp溶液混合形成第一原混合溶液，所述第二L-Trp溶液与第一L-Trp溶液相同；

将第一待测混合溶液放置在黑暗环境下，并在第二预设转速、第二预设温度下振荡培养至第一预设时间后，加入第二对二甲氨基苯甲醛溶液中形成第二原混合溶液，根据第二预设时间进行振荡得到待测溶液，所述第二对二甲氨基苯甲醛溶液与第一对二甲氨基苯甲醛溶液相同；

所述第一预设转速设置为180～200rpm，所述第二预设转速与第一预设转速相同，所述第一预设温度设置为37～45℃，所述第二预设温度与第一预设温度相同，所述第一预设时间设置为1～1.5h，所述第二预设时间设置为2～3min；

比色步骤：将待测溶液分别与比色标准组溶液进行比色得到大肠杆菌预测浓度值。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌浓度检测方法，其特征在于，所述多组大肠杆菌悬浮液与L-Trp溶液在容量配置上等量，所述多组大肠杆菌悬浮液、L-Trp溶液和对二甲氨基苯甲醛溶液采用体积比为3:3:1、3:3:2、3:3:3中的任一配比。

3.根据权利要求1所述的大肠杆菌浓度检测方法，其特征在于，所述多组大肠杆菌悬浮液具体浓度分别为0，5×10⁴cfu/mL,10⁵cfu/mL,5×10⁵cfu/mL,10⁶cfu/mL,5×10⁶cfu/mL,10⁷cfu/mL。