[发明专利]一种针对蛋白激酶p38δ的纳米抗体、核酸、表达载体、宿主细胞及其应用

说明书

本发明提供了一种针对蛋白激酶p38δ的纳米抗体、核酸、表达载体、宿主细胞及其应用，所述纳米抗体具有至少一种以下所示的互补决定区：如SEQIDNO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1；如SEQIDNO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2；和如SEQIDNO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3。此纳米抗体具有针对蛋白激酶p38δ独特的抗原互补决定区，对蛋白激酶p38δ显示出了高度特异的结合活性，能够有效抑制p38δ蛋白激酶的活性。且不与p38MAPK的其他家族蛋白p38α、p38γ和p38δ发生交叉反应。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，且特别涉及一种针对蛋白激酶p38δ的纳米抗体、核酸、表达载体、宿主细胞及其应用。

背景技术

p38δ是p38 MAPK家族中的一种丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶，主要参与调控细胞外刺激与细胞内应答之间的信号转导。p38 MAPK家族共有四个成员，即p38α、p38β、p38γ以及p38δ。虽然所有的p38 MAPKs在序列及结构上都高度保守，但是他们在生理和病理环境中的功能却不尽相同。其中，p38α和p38β广泛表达于各种细胞和组织，调控细胞的基本生命活动。例如：p38α在白细胞、肝、脾、小脑、骨髓、甲状腺及胎盘中具有较高的表达水平；p38β主要在脑和心脏中进行表达。而p38γ和p38δ的表达具有组织细胞特异性，并受严格的调控，p38γ主要在骨骼肌中表达；p38δ的表达主要在肺、肾、肠、唾液腺的表皮细胞及睾丸、卵巢、肾上腺和垂体。近年来研究揭示，p38δ在多种疾病的发生发展中发挥重要的调控功能，如糖尿病、免疫疾病、神经退行性疾病、癌症等。p38δ是潜在的疾病诊断生物标志物及治疗靶点。在药物研发方面，由于p38 MAPKs蛋白间高度保守，开发不与其他p38 MAPK蛋白交叉反应的p38δ特异性抑制剂较为困难，因此至今尚无有效的p38δ抑制剂。

纳米抗体是源于重链抗体可变区域的小分子抗体，其分子量约为15kDa，具有亲和力高、稳定性强、组织相容性好以及易筛选、易制备等特点，近年来在治疗型药物抗体、临床检测型抗体、科研运用型抗体等方面得到了广泛的研究与发展。纳米抗体主要是由4个保守的骨架区(FR)和3个抗原互补决定区(CDR)依次交叉串联形成，其中，抗原互补决定区(CDR)是抗原识别及抗原结合的主要执行部位。所以纳米抗体的筛选关键在于获得可以介导与抗原特异性结合的互补决定区。纳米抗体中的互补决定区根据其在整个抗体中的位置不同，可以依次分为三个独立区域，即互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区3(CDR3)。与传统抗体相比，纳米抗体互补决定区的氨基酸序列较长，使得其可以深入抗原较为隐匿的结构中与其相互作用。因此除了结合抗原之外，纳米抗体还可作为抑制剂、激动剂来改变抗原的活性和功能。因此，筛选p38δ特异性的纳米抗体，将为p38δ靶向药物的研发提供一种新策略。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种针对蛋白激酶p38δ的纳米抗体，此纳米抗体具有针对蛋白激酶p38δ独特的抗原互补决定区，对蛋白激酶p38δ显示出了高度特异的结合活性，能够有效的抑制p38δ蛋白激酶的活性。且不与p38MAPK的其他家族蛋白p38α、p38β和p38δ发生交叉反应。

本发明的第二目的在于提供编码所述的针对蛋白激酶p38δ的纳米抗体的核酸。

本发明的第三目的在于提供含有所述的针对蛋白激酶p38δ的纳米抗体的核酸的表达载体。

本发明的第四目的在于提供含有所述的表达载体的宿主细胞。

本发明的第五目的在于提供针对蛋白激酶p38δ的纳米抗体在制备用于检测蛋白激酶p38δ的试剂盒中的应用。

本发明的第六目的在于提供针对蛋白激酶p38δ的纳米抗体在制备抑制蛋白激酶p38δ活性的药物中的应用。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。