[发明专利]一种利用5SrRNA鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法

权利要求书

1.一种利用5S rRNA鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其步骤是：

(1)利用总RNA提取试剂盒或TRIzol试剂常规提取动物细胞总RNA的方法，提取鱼类性腺组织总RNA，利用核酸分析仪测定OD260/280值，判断RNA纯度；利用琼脂糖凝胶电泳法分离总RNA，观察5S rRNA,18S rRNA和28S rRNA的亮度和分布，所述的5S rRNA的大小在130～150个核苷酸之间，其在微毛细管电泳的峰值通常在接近140nt的位置，总RNA的值指所有覆盖区域所产生的面积大小；

(2)将提取的性腺总RNA进行微毛细管电泳，根据核酸分析软件所得出的RNA类型覆盖区域面积大小，计算其中5S rRNA占总RNA的比例；

(3)根据5S rRNA占总RNA比例判断鱼类早期发育阶段的生理型雌雄，其中5S rRNA比例小于或等于9.0％时判断为精巢组织，5S rRNA比例大于或等于12％时判断为卵巢组织。

2.根据权利要求1所述的一种利用5S rRNA鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中鱼类性腺组织通过解剖或用微量性腺取样工具进行非致死采样，取1mg～100mg的微量性腺组织，利用步骤中(1)的试剂盒进行总RNA快速提取。

3.根据权利要求1所述的一种利用5S rRNA鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中所提及的鱼类性腺组织是指性别分化完成，卵巢中包含有初级卵母细胞的鱼类性腺组织，不包括性腺未分化、已发育成熟或临近产卵期的鱼类性腺组织。

4.根据权利要求1所述的一种利用5S rRNA鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其特征在于：所述步的骤(1)中性腺组织总RNA提取过程中，使用一种除性腺外的同种鱼类组织作为提取性腺组织RNA的对照，用同样的方法提取该组织总RNA，该组织总RNA通过OD260/280值测定，琼脂糖凝胶电泳或微毛细管电泳检测判断总RNA质量合格，进行后续性腺组织总RNA样品分析。

5.根据权利要求1所述的一种利用5S rRNA鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其特征在于：所述步骤(2)中总RNA微毛细管电泳及后续分析依赖于微量核酸分析软件，鉴定5S rRNA占总RNA比例的软件。

6.根据权利要求1所述的一种利用5S rRNA鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其特征在于：所述步骤(3)中鱼类性腺因遭受激素、环境应激条件发生性腺组织全部或部分逆转，精巢全部或部分转变成卵巢，或卵巢全部或部分转变成精巢，5S rRNA占总RNA比例发生变化，不能准确判断鱼类生理型性别。