[发明专利]一种无血清、无蛋白和无DMSO的细胞冻存液及其应用

说明书

本发明公开一种无血清、无蛋白和无DMSO的细胞冻存液及其应用。本发明首先公开了一种无血清、无蛋白和无DMSO的细胞冻存液，包括以下组分：葡萄糖注射液、复方氨基酸注射液、甘油、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、蔗糖、羟乙基淀粉、三磷酸腺苷‑二钠氯化镁和水。本发明进一步公开了上述细胞冻存液在冻存细胞中的应用。本发明细胞冻存液的成分明确，批次稳定，符合产业转化要求。另外，本发明细胞冻存液无血清、无蛋白和无DMSO，在冻存细胞时可长时间稳定维持细胞的活性和干性，复苏后的细胞可直接用于临床应用，符合临床应用的安全性要求和有效性要求。

技术领域

本发明涉及细胞冻存领域。更具体地，涉及一种无血清、无蛋白和无DMSO的细胞冻存液及其应用。

背景技术

目前，细胞治疗在临床上的应用越来越广泛。尤其，干细胞治疗在退行性、损伤性、遗传缺陷性等疾病的治疗中具有巨大的优势和广阔的发展前景(Ella Buzhor,Lucy,Leshansky,Jacob Blumenthal,et al.Cell-based therapy approaches:the hope forincurable diseases.Regenerative Medicine.(2014)9(5),649–672)。而高效安全的细胞制剂是细胞治疗中的关键因素。传统的细胞制剂由活细胞和电解质溶液(如勃脉力A)混合组成。在制备完成后，一般需要在12h内进行回输，超过12h细胞活率下降，将严重影响细胞的治疗效果。同时，细胞制剂在临床应用前无法得到无菌、支原体等指标的最终判定，因此，给细胞治疗带来了很大的不便和风险。

细胞冻存是细胞长期保存的重要手段。细胞冻存液通过冷冻保护剂在冻存过程中对细胞进行保护，以减少或防止冷冻冰晶对细胞造成的损伤。现有技术中的细胞冻存液通常包含培养基、胎牛血清和二甲基亚砜(DMSO)等。胎牛血清含有动物源性物质，成分复杂，不能用于临床。DMSO虽然是一种渗透性很强的细胞保护剂，但对细胞和组织有一定的毒性作用。有研究报道，DMSO在细胞治疗中的毒性总发病率为1/70(Bekkem A,Selby G,Chakrabarty JH:Retrospective Analysis of Intravenous DMSO Toxicity inTransplant Patients.Biology of Blood and Marrow Transplantation 2013,19(2):S313.)。在临床应用中，部分患者在输注含DMSO的细胞制剂后会出现皮疹，恶心，呕吐，低血压等不良反应，更有部分患者出现严重的肾功能衰竭和心血管紊乱(Alessandrino EP,Bernasconi P,Caldera D,et al.Adverse events occurring during bone marrow orperipheral blood progenitor cell infusion:analysis of 126cases.Bone MarrowTransplant 1999；23:533-7.)。由于血清和DMSO潜在的风险，冷冻的细胞制剂复苏后回输前通常需要先洗涤细胞，以去除血清或DMSO等不能用于临床的成分。虽然可以通过洗涤降低毒副作用发生率，但洗涤过程会导致细胞数量明显减少，尤其是干细胞类本身数量较少，进一步丢失可能会因为移植细胞量不足而导致治疗失败。此外，复苏后洗涤细胞不仅操作繁杂还会增加细胞污染的风险。

因此，需要提供一种新型的无血清和无DMSO的细胞冻存液，不仅能有效、安全地保护细胞，还能在复苏后直接用于输注，为细胞治疗的临床应用起到积极意义。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种无血清、无蛋白和无二甲基亚砜(DMSO)的细胞冻存液，该细胞冻存液在冻存细胞时可长时间稳定维持细胞的活性和干性，复苏后的细胞可直接用于临床应用。

本发明的另一个目的在于提供上述细胞冻存液在冻存细胞中的应用。