[发明专利]一种重组I型人源化胶原蛋白多肽及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了一种重组I型人源化胶原蛋白多肽及其制备方法和用途。本发明提供的重组I型人源化胶原蛋白多肽包含以SEQ ID No.1所示的序列的n个重复，n为大于等于1的整数，其中当n为大于等于2的整数时，各重复序列之间是直接连接的；任选地，在所述重组I型人源化胶原蛋白多肽的N末端包含能够通过TEV蛋白酶切除的氨基酸序列。本发明提供的重组I型人源化胶原蛋白多肽具有促进细胞黏附的活性，所述重组蛋白的氨基酸序列选自天然胶原蛋白氨基酸序列，应用于人体不会产生免疫反应，并且其制备方法简单，在低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体而言，涉及一种重组I型人源化胶原蛋白多肽及其制备方法和用途。

背景技术

胶原蛋白(collagen)是一类蛋白质家族，一般为白色、透明、无分支的原纤维，是皮肤和骨骼的基础支撑物，可以占到蛋白质总量的25％～35％，主要分布于人体的皮肤、血管、骨骼、筋腱、牙齿和软骨等处，是这些组织的主要基质和支架，保护并连结各种组织，在体内发挥着重要的生理功能。因此，胶原蛋白可以广泛的应用在医药和化妆品等行业中。根据胶原蛋白在体内的分布和功能特点，可以将胶原蛋白分成间质胶原、基底膜胶原和细胞外周胶原。间质型胶原蛋白分子占整个机体胶原的绝大部分，包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白分子，Ⅰ型胶原蛋白主要分布于皮肤、肌腱等组织，在医学上的应用最为广泛。

然而，天然胶原蛋白不溶于水，性质不均一，很难被人体直接利用，往往需要利用化学手段处理之后才能使用。而且，当前市场上销售的胶原蛋白产品都是取自猪、牛、鱼等动物组织，难以避免病毒感染的风险，同时由于无法与人体相容，会导致免疫排斥和过敏症状的出现。如果从人胎盘原料中提取胶原蛋白，不仅来源有限，更面临法律的严惩。所以，目前胶原蛋白只能在化妆品和保健品中使用，根本无法发挥胶原蛋白的原本生物学功能。

生产胶原蛋白的传统方法是利用酸、碱、酶解法处理动物来源的组织，提取胶原蛋白衍生物。这些方法提取的胶原蛋白本身已经丧失了原有的生物学活性，无法应用于生物医学领域发挥其真正的功能。大多数经过制备后的胶原蛋白产品拉伸强度较弱，纯胶原蛋白在体内降解较快，可能存在潜在的抗原性，以及由于胶原蛋白的来源、加工工艺和原料配比的差异，产品的营养成分及饲用价值也不相同，并且皮料在加工过程中不仅要接触许多化学物质，且容易受到细菌的污染，这些问题均严重限制了胶原蛋白的应用。虽然国外研究机构通过培育含人胶原蛋白基因的小鼠，得到了含有人胶原蛋白的乳汁，但是这样生产的成本过高，生产周期过长，无法投入大规模生产。

TEV Protease是一种在大肠杆菌中重组表达的带His标签(6×His tag)的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus，TEV)的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione S-transferase(GST)、His或者其它标签。

因此，找到一种既能够被人体迅速吸收、制备方法简单易得、成本低廉，同时能够起到人体胶原蛋白功能和特性的产品是当务之急。

发明内容

发明要解决的问题

针对上述本领域中异源胶原蛋白生物活性低、容易诱发免疫反应，以及人源胶原蛋白生产成本高、周期长、无法大规模生产等一系列问题所导致的胶原蛋白利用率低的情况，本发明提供了一种重组I型人源化胶原蛋白多肽，同时提供了其制备方法和用途。

用于解决问题的方案

第一方面，本发明提供了一种重组I型人源化胶原蛋白多肽，其中，所述重组I型人源化胶原蛋白多肽包含以SEQ ID No.1所示的序列的n个重复，n为大于等于1的整数，其中当n为大于等于2的整数时，各重复序列之间是直接连接的；任选地，在所述重组I型人源化胶原蛋白多肽的N末端包含能够通过TEV蛋白酶切除的氨基酸序列。