[发明专利]建立胶体金免疫层析法检测MxA试剂盒

说明书

本发明是建立胶体金免疫层析法检测MxA试剂盒，属于体外诊断试剂盒技术领域。其特征为运用胶体金免疫层析技术、重悬技术、封闭技术、标记技术等制备出的一种MxA诊断试剂盒，适用范围宽，可应用于临床，操作简单便捷，对操作人员要求较低，精密度高，作用安全，可快速确定是否为病毒性感染。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂盒技术领域，具体涉及一种胶体金免疫层析法检测黏病毒抗性蛋白A(MxA)试剂盒的建立。

背景技术

感染性疾病是指由致病微生物(细菌、病毒、衣原体、支原体、立克次体、螺旋体、真菌等)通过不同方式引起人体发生感染并出现临床症状的疾病，其中最常见的是细菌和病毒的感染。临床中需快速判别出细菌或病毒感染，指导临床治疗方向。病毒感染时，机体内源性IFN明显增高。MxA蛋白由IFN-α/β诱导产生，能够反映体内IFN表达的情况，有助于鉴别细菌性感染和病毒性感染，其次检测MxA蛋白水平有利于对IFN疗效进行评估。

Mx蛋白的分子量约为70～80kD，其蛋白结构至少由N-末端结构域、中间结构域、C-末端结构域等3个区域组成，约300个氨基酸组成的N-末端结构域是GTP酶的活性区，约100个氨基酸组成的C-末端结构域是GTP酶的效应区，中间结构域是由约150个氨基酸组成。MxA蛋白在细胞质中与滑面型内质网相连接，与病毒的核衣壳相结合后构型发生改变，结合MxA蛋白的核衣壳以纤维状复合物的形式沉积在细胞核周围，活化的MxA蛋白使病毒失去核衣壳，病毒核酸从而被释放出来，又很快被存在于细胞质中的核酸内切酶所降解，因此达到抗病毒作用。MxA具有广谱的抗病毒活性，对多种RNA病毒和部分DNA病毒均有抑制作用，并且MxA水平是代表病毒诱导机体产生IFN状态指标。

许多病毒种类，包括呼吸道合胞病毒、腺毒毒、轮状病毒、流感病毒、疱疹病毒、EB病毒等，可诱导细胞表达MxA增高，表明MxA不是鉴定病毒感染类型的指标。急性感染病人，儿科病人，重症病人，ICU病人，大创伤及休克病人都需要简单，快速鉴别细菌感染或病毒感染，指导药物治疗，并监测病性进展。

目前测定MxA的主要方法包括酶联免疫法和化学发光法，均需专用仪器，且操作繁琐，操作时间长，本发明建立了一种胶体金免疫层析的方法检测MxA，灵敏度高，操作简便，迅捷，10min即可通过免疫层析分析仪得出定量结果。可快速，准确地检测出样品中MxA浓度，用于诊断急性病毒感染发生。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种胶体金免疫层析方法快速、准确对黏病毒抗性蛋白A(MxA)进行定量检测。

本发明的技术方案如下：

一种胶体金免疫层析方法检测MxA试剂盒包含以下主要组分：试纸条(底板作为支撑结构，经处理的样品垫、喷涂有MxA抗体①-胶体金复合物的金垫、包被有MxA抗体②与抗IgG抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次搭接而成)、塑料卡壳、样本处理液(以磷酸盐缓冲液为基质，含有NP-40，作用主要为破碎细胞，释放细胞内蛋白质)。

一种胶体金免疫层析方法检测MxA试剂盒检验原理：如果样本中含有MxA，则MxA首先与胶体金颗粒吸附的MxA抗体①形成MxA-MxA抗体①-胶体金复合物，而后复合物通过毛细管作用继续向上层析至检测线部位，与检测线包被的MxA抗体②形成MxA抗体②-MxA-MxA抗体①-胶体金复合物，从而显示出颜色(胶体金为红色)，而颜色的深浅可以展示出MxA量的多少。如果样本中不含有MxA，则无法形成MxA-MxA抗体①-胶体金复合物，继而检测线部位也不会留有胶体金，从而检测线部位不展现颜色。而不管样本中是否含有MxA，MxA抗体①-胶体金复合物都会向上层析至质控线位置，与质控线预先包被的抗IgG抗体形成抗IgG抗体-MxA抗体①-胶体金复合物，从而显出颜色。