[发明专利]胡椒碱在制备作为人的苦味受体14亚型的激动剂中的应用

说明书

本发明涉及胡椒碱的新用途，胡椒碱在制备作为人的苦味受体14亚型（hTAS2R14）的激动剂中的应用，胡椒碱能够增加肠内分泌细胞Caco‑2中hTAS2R14的mRNA水平和蛋白表达，以及增加其下游磷脂酶C β2和瞬时受体电位离子通道蛋白M5蛋白表达，增加胞内钙的动员，进而增加胰高血糖素样肽1(GLP‑1)前体胰高血糖素原的基因表达和GLP‑1的分泌。hTAS2R14拮抗剂6‑甲氧基黄酮没有减弱胡椒碱对胞内钙的动员的效应，反而促进了胡椒碱对胞内钙的动员。与hTAS2R14藕联的G蛋白的Gβγ亚基抑制剂明显减弱了胡椒碱对GLP‑1的分泌，磷脂酶C β2抑制剂显著减弱了胡椒碱对GLP‑1的分泌。该研究说明胡椒碱是hTAS2R14的高效激动剂。

本发明涉及胡椒碱作用靶点的发现，胡椒碱能够激活人的苦味受体14亚型(hTAS2R14)，是hTAS2R14的一个高效激动剂。具体为胡椒碱能够激活消化道内分泌细胞hTAS2R14，可作为在制备糖尿病、肥胖症等治疗和预防药物中的应用。

背景技术

味觉强烈影响着食物的偏好和摄取，脊椎动物对食物或化合物的感受器是不同的味觉受体(taste receptors,TASRs)，味觉受体最初被发现于口腔的味蕾中。人的味觉受体包括两种类型，即甜味受体(hTAS1Rs)和苦味受体(hTAS2Rs)。hTAS2Rs是一类G蛋白藕联受体(GPCRs)，由疏水性七次跨膜区域、胞外较短的氨基末端、胞内羧基末端、3个细胞外环状结构和3个细胞内环状结构构成。hTAS2Rs信号通路具有高度的保守性。hTAS2Rs被配体激活后，hTAS2Rs与Gαβγ复合体分离，通过两种途径发挥作用：(1)Gαgust-PDE途径，TAS2Rs被激活后使G蛋白α亚基味导素(Gαgust)分离，从而导致磷酸二酯酶(PDE)异构化，cAMP水平下降；cAMP水平下降导致cAMP对离子通道的抑制作用解除，触发选择性的Ca²⁺通道开放，继而引起细胞内Ca²⁺浓度的升高，细胞膜去极化，使神经递质或激素释放。(2)Gβγ-PLCβ2途径，hTAS2Rs被激活后释放Gβγ亚基，进而使磷脂酶β2(PLCβ2)活化，产生三磷酸肌醇(IP3)和二酰基甘油，IP3激活内质网上其受体3(IP3R3)，引起Ca²⁺动员、胞内Ca²⁺增加，而DAG使PKC活化引起胞内Ca²⁺增加，这些使细胞膜上的瞬时受体电位离子通道蛋白M5(TRPM5)激活，导致阳离子如Na+等内流和膜去极化，使神经递质或激素释放。

目前已知的人类TAS2Rs有25个，包括hTAS2R1，3，4，5，7，8，9，10，13，14，16，19，20，30，31，38，39，40，41，42，43，45，46，50，60，其中hTAS2R14、10、46三个亚型的激动剂谱远远大于其他亚型。TAS2Rs还存在于口腔外组织中，如呼吸、胃肠、脑等系统。

肠是最早被发现存在味觉感受信号的口腔外组织(Proc Natl Acad SciUSA1996；93(13):6631-6634)。早期报道发现胃肠道hTAS2R14激活可促进肠促胰酶肽的分泌，从而抑制食欲。近年来的报道显示，呼吸道hTAS2R14激活后可改善阻塞性气道疾病。目前hTAS2R14被激活后引起的生物功能仍有待研究，。

胡椒碱(piperine，Pip)是黑胡椒(胡椒科胡椒属)的主要刺激性成分和特有气味的化合物，是黑胡椒中含量最高的天然生物碱(2％-9％)。黑胡椒的粗提物和活性成分(主要是生物碱)具有广泛的药理活性，特别是抗氧化、抗抑郁、肝保护、抗微生物、抗肥胖、治疗认知障碍、降血糖、抗高脂血症、免疫增强和抗炎等。然而，未见胡椒碱作为苦味受体14激动剂的报道。

发明内容

1.发明目的

本发明目的发现胡椒碱在作为人的苦味受体14亚型的激动剂，拓展了胡椒碱的新用途。

2.技术方案