[发明专利]一种基于玉米秸秆酶解液基料分段发酵提高杆菌霉素D产量的方法

权利要求书

1.一种基于玉米秸秆酶解液基料分段发酵提高杆菌霉素D产量的方法，包括以下步骤：

将枯草芽孢杆菌种子液接种于含玉米秸秆酶解液上清液的发酵培养基上，进行分段发酵，取发酵液进行离心、酸沉、旋蒸、干燥，得到杆菌霉素D；

所述分段发酵的条件包括：所述接种后，每隔36～60h补加新的发酵培养基进行补料发酵培养，最后一次补料后发酵108h，得到发酵液；所述补料的次数为1～4次。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述接种的量为3％～5％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌种子液的制备方法包括：将枯草芽孢杆菌接种至种子培养基中，37℃培养至OD₆₀₀为0.6～1.0。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述种子培养液包括牛肉膏2～4g/L、氯化钠4～6g/L和蛋白胨5～15g/L，pH值为7.2。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括以下重量份的组分：玉米秸秆酶解液上清液50～200份、酵母膏0.05～0.2份、L-谷氨酸钠0.3～0.7份、KH₂PO₄0.05～0.2份和KCl 0.03～0.07份，pH值为7.2。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述玉米秸秆酶解液上清液的制备方法包括以下步骤：将玉米秸秆粉末与纤维素酶和木聚糖酶按照质量比为1～3g：4～8mg：3～7mg混合进行酶解，离心，得到玉米秸秆酶解液上清液；所述酶解的过程中，水的添加量为玉米秸秆粉末质量的30～70倍。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述纤维素酶的酶活力为100000U/g，所述木聚糖酶的酶活力为50000U/g。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述酶解的温度为55℃，所述酶解的时间为48～84h。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分段发酵的条件为：31～36℃，180r/min。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述补加的新的发酵培养基的体积为初始的发酵培养基体积的20％～60％。