[发明专利]口含烟中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物体系、检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种口含烟中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物体系，其特征在于，所述引物体系包括沙门氏菌23S rRNA引物组、沙门氏菌sseL引物组、金黄色葡萄球菌23S rRNA引物组和金黄色葡萄球菌Coa引物组4组引物组，每组所述引物组包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP；其中，

所述沙门氏菌23S rRNA引物组中，所述外引物F3如SEQ ID No.1所示，所述外引物B3如SEQ ID No.2所示，所述内引物FIP如SEQ ID No.3所示，所述内引物BIP如SEQ ID No.4所示；

所述沙门氏菌sseL引物组中，所述外引物F3如SEQ ID No.5所示，所述外引物B3如SEQID No.6所示，所述内引物FIP如SEQ ID No.7所示，所述内引物BIP如SEQ ID No.8所示；

所述金黄色葡萄球菌23S rRNA引物组中，所述外引物F3如SEQ ID No.9所示，所述外引物B3如SEQ ID No.10所示，所述内引物FIP如SEQ ID No.11所示，所述内引物BIP如SEQ IDNo.12所示；

所述金黄色葡萄球菌Coa引物组中，所述外引物F3如SEQ ID No.13所示，所述外引物B3如SEQ ID No.14所示，所述内引物FIP如SEQ ID No.15所示，所述内引物BIP如SEQ IDNo.16所示。

2.一种口含烟中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP检测试剂盒包括：

如权利要求1所述的引物体系；LAMP试剂：适用于所述引物体系；

阳性对照，包括浓度为10⁵copies/μL的沙门氏菌及金黄色葡萄球菌源性DNA，且所述DNA中包括每组所述引物组中的F3引物序列和B3引物序列的扩增序列；

阴性对照，非靶基因源性DNA；

空白对照，三蒸水；

反应条件，60～65℃条件下反应20～60min，然后80℃条件下反应10min。

3.如权利要求2所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述引物体系中每组引物组中各引物的浓度分别为：F3引物2μmol/L、B3引物2μmol/L、FIP引物16μmol/L、BIP引物16μmol/L；

所述LAMP检测试剂盒的反应体系包括：LAMP试剂10～15μL，一组所述引物组1μL，所述引物组对应的所述阳性对照、所述阴性对照、所述空白对照、样品DNA中的一种1μL。

4.如权利要求2所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP试剂包括：浓度为20mmol/L的Tris-HCl、10mmol/L的KCl、10mmol/L的(NH₄)₂SO₄、6mmol/L的MgCl₂、2mmol/L的MgSO₄、1.4mmol/L的dNTP、0.1％的TritonX-100、1.2mol/L的Betaine；

所述LAMP检测试剂盒的快捷试剂的制备方法包括：在反应管中加入所述LAMP试剂，一组引物组中浓度为1.6μmol/L的FIP和BIP引物、浓度为0.02μmol/L的B3引物和F3引物，8UBst聚合酶，质量体积比为15％海藻糖的三蒸水溶液25μL；冻干后封闭储存于-20℃的条件下；使用前开启，并加入24μL的三蒸水溶解冻干试剂，再加入所述阳性对照、所述阴性对照、所述空白对照、样品DNA中的一种1μL。

5.如权利要求3或4所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述反应体系还包括变色剂；检测时，发生变色表明检测结果为阳性，未发生变色表明检测结果为阴性。

6.如权利要求3或4所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述反应体系还包括荧光DNA染料；检测时，经荧光PCR仪检测获得荧光图谱为S型扩增曲线表明检测结果为阳性，经荧光PCR仪检测获得荧光图谱不是S型扩增曲线表明检测结果为阴性。