[发明专利]口含烟中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物体系、检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种口含烟中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物体系、检测试剂盒及检测方法，引物体系包括沙门氏菌23S rRNA引物组、沙门氏菌sseL引物组、金黄色葡萄球菌23S rRNA引物组和金黄色葡萄球菌Coa引物组4组引物组，每组引物组包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP；引物体系包括SEQ IDNo.1～SEQ ID No.16的引物。本发明实现利用LAMP法对口含烟中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的检测，检测过程对硬件环境要求不高，检测流程简单，且检测时间快；具有简便高效、结果准确、成本低的优点。

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，特别涉及一种口含烟中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物体系、检测试剂盒及检测方法。

背景技术

口用型无烟气烟草制品通俗称为口含烟，主要包括胶基烟、袋装口含烟、含化烟等，在食品安全检测中，微生物检验有菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。沙门氏菌、金黄色葡萄球菌检测通常按照GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》、GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》进行，这些方法中培养为纯人工操作，在菌落形态特征的观察判断上较为依赖经验；检测时间上，阴性结果需要4d，阳性结果需用生化法辅助确认，时间延长到5至7d。另一方面，生化法检测一般采用Biomérieux公司的Vitek和Vidas设备，价格分别在80w、60w以上，且仍需人工增菌、分离菌株以保证准确性；检测时间上，阴性结果2d，阳性结果又需用培养法确认。

基因扩增检测技术相对传统方法大幅缩短时间、节省大量操作。基因扩增检测技术以温控程序区别可粗分为变温、恒温两类，变温技术以PCR为代表，原位检测时间约0.5 –1d、增菌检测约2d。PCR法需建设符合GB/T 27403要求实验室，通常需50m²场地、￥30万装修费用；关键仪器PCR仪或qPCR仪的报价在5万或30万以上；离心机、移液器等配套仪器也需上万元；DNA提取、反应液配制、反应条件调节等操作需熟练人员；普通样品检测1–2个基因，收费约￥300–500/批次。恒温扩增检测技术如LAMP、HAD、 RPA/RAA等具有反应温度单一、不受热循环仪制约的核心特点，其中大多数方法可在一般环境中的普通恒温设备中运行。

发明内容

为了解决现有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌检测方法对硬件环境要求高、对操作人员的专业要求高，成本高、耗时长的问题。本发明提供一种口含烟中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的LAMP(环介导等温扩增)检测引物体系、检测试剂盒及检测方法，实现利用 LAMP法对口含烟中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的检测，检测过程对硬件环境要求不高，检测流程简单，且检测时间快；具有简便高效、结果准确、成本低的优点。

本发明提供了一种口含烟中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物体系，引物体系包括沙门氏菌23S rRNA引物组、沙门氏菌sseL引物组、金黄色葡萄球菌23S rRNA 引物组和金黄色葡萄球菌Coa引物组4组引物组，每组引物组包括外引物F3、外引物 B3、内引物FIP和内引物BIP；其中，

沙门氏菌23S rRNA引物组中，外引物F3如SEQ ID No.1所示，外引物B3如SEQ IDNo.2所示，内引物FIP如SEQ ID No.3所示，内引物BIP如SEQ ID No.4所示；

沙门氏菌sseL引物组中，外引物F3如SEQ ID No.5所示，外引物B3如SEQ ID No.6所示，内引物FIP如SEQ ID No.7所示，内引物BIP如SEQ ID No.8所示；

金黄色葡萄球菌23S rRNA引物组中，外引物F3如SEQ ID No.9所示，外引物B3 如SEQ ID No.10所示，内引物FIP如SEQ ID No.11所示，内引物BIP如SEQ ID No.12 所示；