[发明专利]一种创制花生新种质与育种方法

权利要求书

1.一种创制花生新种质与育种方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)从花生种子的两个子叶瓣中间剥离种胚，以种胚作为诱变材料进行等离子体诱变；

(2)等离子体诱变处理后的花生种胚，进行表面消毒；

(3)经表面消毒的花生种胚在无菌水中浸泡8～12小时；

(4)浸泡的种胚取出，放入经高压灭菌的培养皿中，剥离胚小叶，随即接种于体细胞胚诱导培养基中进行培养；

(5)接种胚小叶培养的体细胞胚诱导培养基为：MS+5～15mg/L2,4-D；

(6)在体细胞胚诱导培养基上培养，胚小叶外植体开始形成体细胞胚，之后逐渐有体细胞胚形成；将存活的形成体细胞胚的胚小叶外植体转移到体细胞胚萌发培养基上培养，诱导体细胞胚萌发成苗；

(7)体细胞胚萌发培养基为：MS+4～6mg/LBAP；

(8)在体细胞胚萌发培养基上培养，每4周继代培养一次，促使体细胞胚萌发成苗；当小苗长到1.5cm以上时，即可作为接穗嫁接；

(9)以灭菌的沙子中无菌催芽的8～10日龄花生种子实生苗作为砧木，体细胞胚萌发长成的高1.5cm以上的小苗作为接穗，采用插接法在超净工作台中进行无菌嫁接，用封口膜包扎好嫁接口；嫁接苗在沙子中再培养3～5天，促使嫁接伤口愈合，然后移栽田间；

(10)嫁接苗移栽田间前2个周注意保湿，之后按常规进行田间管理；成熟后按单株收获M2代种子；

(11)收获的M2代种子按单株种成株行，以诱变亲本作为对照；

(12)在M2代性状发生变异和分离的株行中，选择结果多、荚果整齐，分枝数7～10条，抗倒伏，抗叶斑病的优良单株，单独收获荚果M3代种子；

(13)收获的M3代优良单株荚果种子按株行种植，生育期观察标记出苗早、开花集中、抗倒伏能力强、株形直立的单株，结合收获期选择结果多、荚果整齐，分枝数7～10条，抗叶斑病的优良单株，单独收获单株荚果M4代种子；

(14)收获的M4代优良单株荚果种子按株行种植，生育期和收获期表现一致的优良单株混收，成为入选的优良株系；

(15)入选的优良株系进行产量鉴定试验；试验设置3次重复，每个重复播种1垄；收获后晒干，称重产量；选择产量高的株系晋升为品系；

(16)入选的品系进行产量比较试验；试验设置3次重复，每个重复播种3垄；以当地品种区域试验对照品种或当地推广品种作为对照；成熟收获后晒干，称重产量；选择产量高的品系，参加省品种区域试验，试验通过，申报国家非主要农作物品种登记。

2.根据权利要求1所述的一种创制花生新种质与育种方法，其特征在于：步骤(2)中，消毒方法：用70～75％的酒精浸泡20秒，再用0.1％升汞溶液侵泡8～10分钟，之后用高压灭菌的无菌水清洗3～5次。

3.根据权利要求2所述的一种创制花生新种质与育种方法，其特征在于：步骤(2)中，消毒操作在超净工作台中进行，操作用的器具需高压灭菌或酒精灯灼烧。

4.根据权利要求1所述的一种创制花生新种质与育种方法，其特征在于：步骤(4)中，每粒种子8个胚小叶，也即种子出苗时的第一对真叶，每个真叶有4个小叶，一对真叶有8个小叶，这8个小叶是由8个胚小叶发育而成。

5.根据权利要求4所述的一种创制花生新种质与育种方法，其特征在于：步骤(4)中，选用胚小叶的理由是：与幼叶或成熟叶片相比，胚小叶分化程度低，再生能力强。

6.根据权利要求1所述的一种创制花生新种质与育种方法，其特征在于：步骤(5)和步骤(7)中，调整培养基的pH5.8，在高压灭菌锅120℃灭菌20分钟。

7.根据权利要求1所述的一种创制花生新种质与育种方法，其特征在于：步骤(6)在体细胞胚诱导培养基上培养2周后，胚小叶外植体开始形成体细胞胚，之后逐渐有体细胞胚形成；由于辐照诱变作用，使部分胚小叶外植体褐化凋亡；一般适宜诱变剂量为半致死量或半再生率时的剂量，即一半外植体不能形成体细胞胚；培养4周后，将存活的形成体细胞胚的胚小叶外植体转移到体细胞胚萌发培养基上培养，诱导体细胞胚萌发成苗。