[发明专利]一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法

权利要求书

1.一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、于无菌环境下取出健康患者恒牙或智齿上的牙髓，剪成1mm³的小块，剪碎前后分别对牙髓进行洗涤处理，加消化液震荡消化牙髓碎块；

S2、将经步骤S1消化后的牙髓组织用含3%血清的DMEM液体吹散1-3min后静置1-3min，然后加营养液进行离心，弃去离心上清液，获得离心沉淀物；

S3、将步骤S2中获得的离心沉淀物加营养液重悬后，接种于培养箱培养，培养箱内培养条件控制在温度为37℃，CO₂浓度为5%，培养时间为3-7天；

S4、使用无钙、镁离子的PBS洗涤步骤S3中培养获得的细胞，然后加营养液转移至新的培养箱中进行培养扩增，培养箱内培养条件控制在温度为37℃，CO₂浓度为5%，培养时间为2-4天，检测细胞纯度合格即得所需的牙髓间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤S1中的洗涤处理具体指：用无菌PBS缓冲液洗涤牙髓2-3次。

3.根据权利要求1所述的一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤S1中的消化液由质量比1:5-9的Accutase细胞分离溶液和Hank's溶液复配而得。

4.根据权利要求1所述的一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤S1中的消化温度为37℃，消化时间为30-50min。

5.根据权利要求1所述的一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤S2离心条件为：离心温度4-8℃，离心转速500-800g，离心时间5-10min。

6.根据权利要求1所述的一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤S2、S3、S4中营养液为8-12%FBS和0.8-1.5%双抗的DMEM。

7.根据权利要求1所述的一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤S3中营养液每隔1-3天更换一次。

8.根据权利要求1所述的一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤S4中营养液每隔8-12h更换一次。