[发明专利]一种动物源性食品中恩诺沙星碳量子点荧光免疫快速检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种动物源性食品中恩诺沙星碳量子点荧光免疫快速检测试剂盒及其检测方法，属于荧光免疫分析领域。试剂盒由反应杯和试剂组成；其中所述反应杯包被有包被抗原，所述试剂由辣根过氧化物酶标记抗体工作液；恩诺沙星系列标准溶液；20倍浓缩磷酸盐洗涤液；10倍浓缩磷酸盐复溶液；碳量子点荧光反应液A及碳量子点荧光反应液B组成。以碳量子点作为荧光底物，建立了恩诺沙星荧光淬灭免疫分析方法。该试剂盒检测时间为30min，检测限为0.3ng/mL，批内变异系数小于8％，批间变异系数小于15％，水产样品的回收率为90％±30％。本发明的荧光免疫快速检测试剂盒具有特异性高、灵敏度好、操作简便及可实现定量检测的优点。

技术领域

本发明涉及物源性食品中恩诺沙星碳量子点荧光免疫快速检测试剂盒及其检测方法，属于免疫检测技术领域。

背景技术

恩诺沙星(Enrofloxacin，ENR)是一种专门用于治疗动物组织感染的广谱杀菌药，随着近年来的广泛使用，用药带来的副作用日益显现，动物性食品中恩诺沙星的残留被人体摄入后越来越危害人体健康，因此对恩诺沙星进行有效的快速检测十分必要。

基于抗原抗体特异性结合反应的免疫分析技术因其独特的识别形式以及其特异性、可逆性及反应阶段性等优异的特点得到了广泛的关注及研究，并逐渐成为临床疾病诊断的重要检测手段。免疫诊断技术也与生化诊断和分子诊断技术构成了体外诊断的三大领域。在世界粮农组织(FAO)的推荐下，免疫分析方法也被逐渐应用于食品安全检测分析领域，并已成为了食品安全检测的重要组成部分。包括ELISA，化学发光酶免疫分析，荧光免疫分析，免疫层析传感分析(ICS)在内的各种免疫测定已被广泛用于现场快速检测农产品和动物产品中的食品污染物残留。

以荧光信号代替比色信号的免疫分析具有灵敏度高、抗击质干扰能力强等特性，被广泛应用。目前荧光分析的主要标记材料多为荧光微球(FM)，量子点(QD)和上转换纳米粒子(UCNP)等，但QDs重金属毒性大以及UCNPs荧光种类少等问题成为了二者关键性的限制因素。碳量子点(CDs)作为一类具有优异光致发光性能的零维(OD)纳米材料，是继半导体量子点成功合成以来被广泛研究的荧光纳米材料。基于此，通过简单的方法在水溶液环境中制备了碳量子点，并建立了快速，高灵敏度的物源性食品中恩诺沙星碳量子点荧光免疫快速检测试剂盒。目前，碳量子点荧光免疫快速检测试剂盒还未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了用于动物源性食品中恩诺沙星检测的碳量子点荧光免疫快速检测试剂盒及其检测方法，为了实现上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种动物源性食品中恩诺沙星碳量子点荧光免疫快速检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的反应杯和设在盒体内的试剂；其中所述反应杯包被有包被抗原，所述试剂包括：辣根过氧化物酶标记抗体工作液；恩诺沙星系列标准溶液；20倍浓缩磷酸盐洗涤液；10倍浓缩磷酸盐复溶液；碳量子点荧光反应液A及碳量子点荧光反应液B。

优选的，碳量子点荧光反应液A包含过氧化氢和碳量子点，碳量子点荧光反应液B包含3,3',5,5'-四甲基联苯胺和碳量子点。

碳量子点的制备包括如下步骤：

(1)碳量子点的合成：将3g柠檬酸和5g尿素添加到10mL超纯水中以形成透明溶液，然后将溶液在800W微波炉中加热5分钟，在此期间溶液从无色液体变为棕色，最后变为暗褐色的簇状固体，冷却至室温后，加入20mL水以溶解产物；

(2)碳量子点的纯化：将溶解后的产物于5000rpm离心10min后，装入3500Da透析袋，常温下用水透析过夜，得到棕色具有荧光的溶液，在365nm激发光激发下，在400nm-600nm处有荧光。

所述反应杯为容积为300μL或500μL或其他容积的单孔或8联反应杯；所述恩诺沙星系列标准溶液分别是从恩诺沙星纯品中稀释得到，恩诺沙星标准品中恩诺沙星浓度分别为：0.3ng/mL、0.9ng/mL、2.7ng/mL、8.1ng/mL和24.3ng/mL。