[发明专利]靶向刺突蛋白HR1的订书肽、制备方法及抗冠状病毒应用

权利要求书

1.一种靶向刺突蛋白HR1的订书肽，其特征在于：以SEQ ID NO.1所示的直链肽SLDQINVTFLDLEYEMKKLEEAIKKLEESYIDLKEL-NH₂为肽链模板，将21_E和25_K同时被S₅替换并环合得到，S₅为2-氨基-2-甲基-6-庚烯酸。

2.权利要求1所述的靶向刺突蛋白HR1的订书肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、溶胀氨基树脂后，并多次洗涤树脂；

B、使用脱保护试剂脱去氨基酸上的Fmoc保护基；

C、使用天然氨基酸缩合的反应液Fmoc-AA-OH、肟基氰乙酸乙酯以及DIC进行缩合反应，使首个氨基酸的C端与氨基树脂偶联；

D、重复进行脱保护-耦合操作，依照氨基酸序列合成肽链；其中，环合位点以S₅同时替换第21和25位氨基酸；

E、使用吡啶和醋酸酐混合溶液对N端脱完保护的氨基酸进行乙酰化；

F、在环合剂作用下使环合位点反应，环合肽链；

G、使用切割试剂将肽链从载体上切下，纯化后得相应订书肽。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

其中，步骤A中，氨基树脂在DCM溶液中溶胀20min；溶胀后依次使用DMF、DCM、DMF分别洗涤树脂5次；

步骤B中，所述脱保护试剂为肟基氰乙酸乙酯、哌啶及DMF的混合溶液，肟基氰乙酸乙酯的质量百分比为20％，肟基氰乙酸乙酯的浓度为0.1mol/L；脱Fmoc保护基的操作条件如下：采用脱保护试剂连续两次作用5min，反应温度为20～30℃。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

其中，步骤C中，进行缩合反应时，以Fmoc-AA-OH为4倍当量，肟基氰乙酸乙酯为4倍当量，DIC4倍当量进行缩合反应，反应温度为50～60℃，偶联反应时间为20-30min；

步骤D中，连接环化剂时，以Fmoc-S₅-OH2倍当量，肟基氰乙酸乙酯2倍当量，DIC2倍当量进行缩合反应，反应温度为50～60℃，反应时间2h。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

其中，步骤E中，吡啶和醋酸酐混合溶液中，吡啶和醋酸酐的体积比为1:1；

步骤F中，环合剂为GrubbsⅠ试剂的二氯乙烷的溶液，固相载体量:GrubbsⅠ试剂:二氯乙烷＝0.3mmol:58mg:6mL；环合时，将氨基酸在环合试剂中震荡两次，每次2h，反应温度为20～30℃。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

其中，步骤G中，切割试剂为TFA、TIPS、H₂O的混合溶液，体积比为95:2.5:2:5，所述切割试剂与直链肽的体积质量比为1:10mL/mg，切割的温度为20～30℃，切割的时间为4h；

纯化时，先在粗品肽中加入冰乙醚，在3500r/min下离心3min，重复操作5次；再使用反向高效液相色谱对离心后自然挥干的粗品肽进行纯化，条件如下：色谱柱：YMC-PackODS-AQ柱；流动相：流动相A为0.1％TFA/水，流动相B为0.1％TFA/乙腈；梯度洗脱程序：35％B洗脱0～5min，35％～65％B洗脱5～60min；流速为20mL/min，进样量为1mL，检测波长214nm和254nm。

7.权利要求1所述的靶向刺突蛋白HR1的订书肽在制备抗冠状病毒药物中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述抗冠状病毒药物为抗SARS-CoV-2病毒或抗中东呼吸综合征冠状病毒的药物。

9.一种抗病毒药物组合物，其特征在于，包括活性组分以及药学上可接受的辅料，所述活性组分包含权利要求1所述的靶向刺突蛋白HR1的订书肽。