[发明专利]靶向刺突蛋白HR1的订书肽、制备方法及抗冠状病毒应用

说明书

本发明提供了靶向刺突蛋白HR1的订书肽、制备方法及抗冠状病毒应用，以直链肽SLDQINVTFLDLEYEMKKLEEAIKKLEESYIDLKEL‑NHsubgt;2/subgt;为肽链模板，在DIC‑Oxime缩合体系中，通过Fmoc固相合成法，合成得到肽链，其间在保留关键氨基酸残基的基础上，于特定位置以Ssubgt;5/subgt;和Rsubgt;8/subgt;代替原有氨基酸，连接在树脂上直链肽在GrubbsⅠ试剂的二氯乙烷溶液中进行烯烃复分解反应环合后从树脂上切下得到目标订书肽。本发明的方法简单易行，纯度大，产率高。进一步的实验证实，本发明的订书肽可显著抑制SARS‑CoV‑2病毒、HnCoV及MERS感染，具备广谱抗病毒作用。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种多肽药物，具体涉及一种靶向刺突蛋白HR1的订书肽、制备方法及应用。

背景技术

SARS-CoV-2导致的肺炎疾病疫情对我国国计民生产生了不可估量的损失。作为2003年SARS病毒的姐妹病毒，SARS-CoV-2引发的肺炎疫情范围更广、危害更大。人感染了SARS-CoV-2后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。SARS-CoV-2的最可怕之处在于较强的传染性以及较长的潜伏期，由此引发的无症状传染者使得疫情防控工作难度加大。在这场疫情防控攻坚战中，寻找抑制SARS-CoV-2的手段是一个极大的挑战。虽然目前预防或治疗SARS-CoV-2的特效药物还没有。但是像瑞德西韦和一些糖皮质激素，如地塞米松，已经产生了一些好的效果，但药物副作用明显。

多肽分子以其亲和力高、选择性好、毒性低等优点，在药物开发中占据着重要的地位。但多肽的成药性问题一直饱受争议，主要原因在于：1)物理环境下多肽稳定性差，易被酶降解；2)多肽透膜能力较差，无法直接进入细胞发挥作用。为此，多个课题组开发了订书肽(Stapledpeptides)策略来提高多肽的成药性。订书肽是近年来获得广泛关注的一类稳定性强、透膜性好的多肽模拟物，在很多胞内PPIs的调控方面都展示了很好的潜力。

目前已经在结构研究中，EK1肽与HR1结构域作为螺旋构象结合，其特征是高度保守的亲水相互作用。然而，EK1作为一种直链肽，具有蛋白水解稳定性和灵活的构象，在一定程度上限制了对膜融合和感染的有效抑制。近年来，订书肽技术利用钌催化烯烃复分解交联肽侧链中的两个非自然氨基酸，可以通过预先形成的稳定螺旋构象，有效提高肽的药理性能。值得注意的是，引入的碳氢主链有时可以增强肽与目标蛋白之间的亲水相互作用。因此，设计合成一系列的订书肽，提高肽的稳定性，螺旋度和抗病毒活性，可能是未来抗病毒药物开发优良的先导化合物。

发明内容

本发明依托上述研究进行，针对目前新型冠状病毒、mers病毒等药物治疗缺乏的现状，提供一种具有订书肽及其制备方法和应用。为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

本发明机理如下：EK1肽与HR1结构域作为螺旋构象结合，其特征是高度保守的亲水相互作用；多肽融合抑制剂可有效与S2亚基中的HR1区域结合，从而阻止HR1区域蛋白与HR2形成6-HB，最终阻断冠状病毒中S蛋白介导的融合机制，抑制病毒的入侵。

但EK1作为一种直链肽，具有蛋白水解稳定性和灵活的构象，在一定程度上限制了对膜融合和感染的有效抑制的缺陷进行。本发明以EK1为母肽，设计并合成了一系列基于EK1肽的n，n+4和i，i+7订书肽。