[发明专利]ATP7B基因敲除小鼠模型的构建方法

权利要求书

1.ATP7B基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)基于CRISPR-Cas9系统设计靶向ATP7B基因的sgRNA；

2)sgRNA与Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后，一起注射到小鼠受精卵中，然后将受精卵移植到假孕母鼠体内，产出F0代，对F0代进行PCR鉴定，将得到的阳性F0代与野生型小鼠交配获得F1代杂合子，F1代杂合子进行自交进一步筛选获得ATP7B基因敲除的纯合子代，最终将纯合子作为ATP7B基因敲除小鼠模型；其中，sgRNA作用位点位于ATP7B基因的2号外显子上，sgRNA作用位点的DNA序列为：5’-CAAGATCCGGAAACTGCAAG-3’和5’-GCATGCCGTCTATTCTTAGT-3’。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用于PCR鉴定的特异性引物包括：

ATP7B-F：5’-TGCCGTCTGTCATGAACCTG-3’；

ATP7B-R：5’-ACACTTTAAAGTGCCCAGGTGG-3’。