[发明专利]一种超长效稳定的FSH及其的表达重组方法及辅助生殖技术

说明书

本发明提供一种超长效稳定的FSH及其的表达重组方法及辅助生殖技术，涉及生物制药技术领域，其中所述超长效稳定的FSH所述FSH的α链的氨基端及β链的羧基端分别融合了CTP，Fc和荧光素酶大小亚基。所述CTP为马或者斑马的CTP，所述Fc为人免疫球蛋白IgG1的重链Fc段，所述荧光素酶大小亚基是Nano荧光素酶具有极高亲和力的大（LgBiT）小亚基（HIBIT）。上述所述的超长效稳定的FSH，其在小鼠体内实验过程中的半衰期大于96小时，可以满足在8‑12天的在体外生殖治疗过程中只注射1‑2次的要求，降低了给药复杂性，避免了由于药物反复注射引起的副作用，实现了真正的长效。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及一种超长效稳定的FSH及其的表达重组方法及辅助生殖技术。

背景技术

重组人卵泡刺激素是辅助生殖技术不可缺少的工具。FSH是一种由脑垂体前叶嗜喊性细胞合成与分泌的高度糖基化蛋白，通过与受体（FSHR）结合，传导下游信号实现其生物学功能。

在国际市场上，FSH相关生物制剂以重组类产品为主导。目前主要是德国默克雪兰诺（Merck Serono）的Gonal-F以及美国默克（Merck  Co.）的Puregon占据着主要地位。传统的FSH产品在人体内半衰期较短（约2小时），进行辅助生殖治疗的患者需要在8-12天的疗程中每天皮下注射1次FSH。这种相对比较频繁的给药方案。美国默克公司生产的FSH-CTP长效FSH，其将体内半衰期约69小时，但仍不能满足IVF等辅助生殖治疗一个疗程（8~12天）的需要。国产的FSH则主要由丽珠集团的尿源产品占据市场，该产品价格较为便宜，且临床疗效与重组产品相当，但存在原材料来源不稳定、尿液供体带来的安全风险等问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中传统的FSH产品在人体内半衰期较短的技术问题。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种超长效稳定的FSH，所述FSH的α链的氨基端及β链的羧基端分别融合了CTP，所述CTP为马或者斑马的CTP。

优选的，所述FSH的α链的氨基端及β链的羧基端还融合了Fc。

优选的，所述Fc通过HIBIT及LgBIT的组合融入在所述FSH上α链和FSH上β链中。

本申请还提供了一种超长效稳定的FSH的表达重组方法，用于上述所述的超长效稳定的FSH的表达重组方法，利用eCGCTP糖基化保护药物蛋白免于蛋白酶的快速降解；利用Fc增大分子量免于体内的快速滤过，利用荧光素酶大小亚基的极高亲和力提高异源二极体的产量，利用荧光素酶大小亚基的极高亲和力提高异源二极体的稳定性。

上述所述的超长效稳定的FSH，其在小鼠体内实验过程中的半衰期大于96小时，可以满足在8-12天的在体外生殖治疗过程中只注射1-2次的要求，降低了给药复杂性，避免了由于药物反复注射引起的副作用，实现了真正的长效。

附图说明

图1为FSH与FSHR的晶体结构；图中显示了FSHα，FSHβ和FSHR三者的相对空间位置。

图2为本申请中eCGCTP融入FSHα链的氨基端及α链的羧基端的生物学活性比较，其中▲表示eCGCTP融入FSHα链的氨基端,●表示eCGCTP融入FSHα链的羧基端；

图3为本发明一实施方式中一种超长效稳定的FSH的结构示意图；结构图中具体显示了eCGCTP融入FSHα链的具体位置

图4为本发明另一实施方式中一种超长效稳定的FSH的结构示意图；该结构中含有Fc和eCGCTP。

图5为本发明再一实施方式中一种超长效稳定的FSH的结构示意图；该结构中在结构三的基础上添加了高亲和力荧光素酶大小亚基HIBIT和LgBIT。