[发明专利]一种诱变产生富硒魔芋突变体的方法

说明书

本发明属于诱变魔芋育种技术领域，具体涉及一种诱变产生富硒魔芋突变体的方法。具体包括：将魔芋球茎消毒后，切块接种于愈伤组织诱导培养基，将愈伤组织，一部分切分转接至愈伤组织继代培养基，再将预培养长出的新愈伤切下转至质量分数0.2％‑0.8％的EMS溶液中培养；另一部分愈伤组织转接于丛生芽诱导分化培养基，将诱导长出的丛生芽按单芽进行切分，转至质量百分比0.4％‑1.2％EMS溶液中培养；将处理的愈伤组织继代培养2‑3次，处理的丛生芽单芽继代培养1‑2次，然后筛选获得耐硒及富硒能力强的诱变愈伤组织和诱变丛生芽，诱导分化获得富硒魔芋突变体。该富硒魔芋突变体经无性扩繁和大田富硒品比试验，成功选育系列富硒魔芋新品系，极大加快了魔芋新育种的进程。

技术领域

本发明属于诱变魔芋育种技术领域，具体涉及一种诱变产生富硒魔芋突变 体的方法。

背景技术

甲基磺酸乙酯(ethy-methan-sulfonate，EMS)是一种常用且能有效改变DNA 结构的烷化剂，能诱发产生高密度的系列等位基因点突变，诱变具有操作简单、 突变频率高、突变专一性与多效性等优点。目前作为植物种质资源创制和新品 种培育的重要方法之一，已被广泛应用与大田作物及园林植物育种中。

地处秦岭腹地的安康市作为全国主要的硒源地之一，被誉为“中国硒谷”； 而魔芋作为安康市的农业五大主导产业之一，是陕南山区的特色优势产业之一。 因此，将两者进行有机结合，符合当前发展与应用的需要。但从目前已有的魔芋 品种及地方种的富硒情况来看，魔芋属于低聚硒作物，耐硒能力差，球茎及芋鞭 等主要器官富硒能力弱，加工后的精粉中硒含量更低，甚至检测不出硒。所以， 选育富硒魔芋品种势在必行。

发明内容

本发明目的是为克服已有技术的不足，提高一种分化率高，容易出现富硒 魔芋突变体的育种方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种诱变产生富硒魔芋突变体的方法，包括以下步骤：

S1、将魔芋三龄球茎消毒、切块后接种于愈伤组织诱导培养基进行培养， 得愈伤组织；

S2、将一部分愈伤组织切分转接至愈伤组织继代培养基进行继代培养，将 培养长出的新愈伤组织切下，转至质量百分比0.2％-0.8％的EMS溶液中，于 室温、黑暗、无菌环境下振荡培养4-8h，除去EMS溶液得诱变愈伤组织；

将另一部分愈伤组织转接于丛生芽诱导分化培养基分化培养得丛生芽，将 丛生芽按单芽进行切分，转至质量百分比0.4％-1.2％的EMS溶液中，于室温、 黑暗、无菌环境下振荡培养6-18h，除去EMS溶液得诱变丛生芽；

S3、将诱变愈伤组织于愈伤组织继代培养基中重复继代培养2-3次，后转 接至含有16-64mg/L Na₂SeO₃的愈伤组织继代培养基中培养20-25天；将诱变丛 生芽单芽转接至芽分化继代培养基中重复继代培养1-2次，后转接至含 32-200mg/L Na₂SeO₃的芽分化继代培养基中培养15-20天；筛选获得耐硒及富 硒能力强的诱变愈伤组织和诱变丛生芽，诱导分化获得再生植株，即富硒魔芋 突变体。

进一步的，S1的消毒具体为：挑选球茎光滑完整、无疤痕、无伤口、芽头 饱满的魔芋三龄球茎，先用流水洗净球茎表面，质量分数0.1％的升汞浸泡处理 40-45min，倒净升汞，无菌水冲洗4-6次；然后质量分数75％的乙醇浸泡2-3min， 倾去乙醇，无菌水冲洗2-3次，无菌滤纸吸干球茎表面水分。

进一步的，S1的诱导培养条件为：暗培养30-35天，维持环境温度25℃±3℃， 相对湿度60％-80％。

进一步的，S2的愈伤组织继代培养基组成为：MS基础成分+1-3mg/L 6-BA+0.5-1mg/L KT+0.5-1.0mg/L NAA+20-40g/L蔗糖，pH5.8-6.5；