[发明专利]基于固体发酵法的碱性复合菌种体系亚麻生物脱胶方法

权利要求书

1.一种新型的基于固体发酵法的碱性复合菌种体系亚麻脱胶方法，特征主要为麻皮自带菌进化工程选育构筑复合脱胶菌种体系过程、利用冷冻法与超声方法结合而成的生物抗性屏障破除过程，以及基于固体发酵法为基础的脱胶过程。

所述麻皮自带菌进化工程选育构筑复合菌种脱胶体系过程如下：

1)将所需脱胶种类的亚麻韧皮纤维梳理蓬松后，浴比1∶30～60，置于有浓度为0.5～1g/L的磷酸二氢钾缓冲液的锥形瓶中，在恒温培养箱中32～37℃条件下培养1d～5d，取上清液加生理盐水稀释至10²～10⁵后，涂布在选择固体平板培养基上，在恒温培养箱中32～37℃条件下培养1～3d，得到所需菌落。上述文中所述的选择固体平板培养基配方如下：2～5g/L所需脱胶亚麻粉末，NaCl 5g/L，琼脂20g/L，在灭菌前需使用超声震荡仪器将该培养基分散均匀：

2)将步骤1)中所得到的菌落，挑选不同形态的菌种接入分别有其他三种选择液体培养基的锥形瓶中，在恒温摇床中以100～250rpm转速培育1～3d，后取各锥形瓶中菌液稀释10²～10⁵涂布于营养固体平板培养基上，在恒温培养箱中32～37℃条件下培养1～3d，在菌落计数器下观察各平板上菌种的生长情况。上述的选择培养基配方如下：选择营养物(果胶、木聚糖、葡甘露聚糖)10g/L，磷酸二氢钾1g/L，NaCl5g/L，硫酸铵1g/L，使用pH10.0的碳酸钠/碳酸氢钠缓冲液溶解。上述步骤中营养固体培养基配方如下：酵母浸粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，磷酸二氢钾1g/L，七水合硫酸镁0.5g/L，琼脂20g/L；

3)将步骤2)中经过比较后，取得生长状况最为良好的(三种)菌种，使用选择驯化培养基进行驯化，传代培养10-15代，得到(三种)菌种使用甘油管法保存备用，构筑碱性复合脱胶菌种体系完毕。上述步骤中选择驯化培养基配方如下：选择营养物(果胶、木聚糖、葡甘露聚糖)10g/L，蛋白胨10g/L，磷酸二氢钾1g/L，NaCl5g/l，硫酸铵1g/L，使用pH10.0的碳酸钠/碳酸氢钠缓冲液溶解。

所述生物抗性屏障破除过程如下：

1)取所需脱胶亚麻以浴比1∶30浸渍在水中，加入5g/L尿素后，搅拌至亚麻纤维呈分散状态，放入超低温-50℃冰箱中0.5h～2h，取出后自然解冻备用；

2)将步骤1)中麻皮不更换浸液放置于超声粉碎机中，温度30～55℃，超声频率40KHz，超声0.5h，重复两次；

3)将步骤2)中麻皮浸液倒去后，冷水洗后热水洗涤，去除麻皮表面尿素，后放置于55℃烘箱中烘干，留样备用；

所述固体发酵法脱胶工程如下：

1)铺麻：取合适的方形塑料容器，将梳理过得待脱胶亚麻放置于容器内，需尽量使其蓬松，置于湿度为50～80％，温度30～37℃的恒温恒湿培养箱中；

2)活化菌种：将选育后的三种特定菌种接入液体培养基中活化，经3～10代后备用；

3)翻麻与接菌：将步骤2)中活化完毕三种菌液混合均匀，后再与蒸馏水混合均匀，其中混合菌种占比为15％。将制备好的接种菌液置于喷壶中，一边翻动容器内亚麻，一边喷洒，保证亚麻菌液接种均匀，待亚麻表面均匀含水即可。脱胶过程进行3～5d，每12h重复步骤3)直至脱胶过程结束；

4)后处理(灭活、漂白)：取出步骤3)处理后的亚麻纤维，使用清水冲洗后，在50℃～75℃水浴锅中，放置于5％过氧化氢水溶液中处理20min～90min，取出后冷水洗涤接热水洗涤，再在烘箱中烘干得到脱胶完毕的亚麻纤维。