[发明专利]硫氧还蛋白还原酶重组蛋白及其免疫单克隆抗体的制备和应用

权利要求书

1.一种硫氧还蛋白还原酶重组蛋白，其特征在于，所述硫氧还蛋白还原酶重组蛋白在氨基酸序列C端添加6个His(HHHHHH)片段。

2.根据权利要求1所述的硫氧还蛋白还原酶重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示。

3.一种硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNO:2或SEQ ID NO.4所示。

4.根据权利要求3所述的硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的编码基因，是对硫氧还蛋白还原酶的氨基酸序列密码子优化后，通过基因合成的方式得到编码基因。

5.重组载体和/或表达菌株，其特征在于，所述重组载体和/或表达菌株含有权利要求3或4所述硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的编码基因；

优选地，是将所述编码基因亚克隆到载体得到；

优选地，所述载体选自表达载体或者克隆载体；例如，所述表达载体为pET28b；例如，所述克隆载体为pUC19。

6.一种硫氧还蛋白还原酶重组蛋白编码基因的表达方法，包括如下步骤：

(1)将硫氧还蛋白还原酶氨基酸序列密码子优化得到编码基因，利用基因合成的方式得到编码基因的DNA片段；

(2)构建重组载体；

PCR扩增步骤(1)得到的DNA片段，和载体用限制性内切酶进行双酶切，用DNA连接酶连接纯化的酶切产物，得到重组载体；优选地，所述载体选自克隆载体或表达载体；

(3)将重组载体转化到感受态细胞，培养筛选，测序验证；

(4)构建表达菌株或表达细胞，表达蛋白；

优选地，所述表达方法还可以包括步骤(5)重组蛋白纯化，更优选利用Ni树脂纯化方式纯化。

7.根据权利要求6所述的硫氧还蛋白还原酶重组蛋白编码基因的表达方法，其特征在于，所述编码基因如权利要求3或4所述；

优选地，所述硫氧还蛋白还原酶重组蛋白编码基因由大肠杆菌表达或者由哺乳细胞表达。

8.根据权利要求6或7所述的硫氧还蛋白还原酶重组蛋白编码基因的表达方法，所述步骤(2)的载体为表达载体，得到重组表达载体，

所述步骤(3)为将重组表达载体转化至感受态细胞，培养筛选得到阳性转化子，经菌落PCR筛选并测序确定为目标表达菌株；

所述步骤(4)为将目标表达菌株进行培养，体外诱导表达，得到所述硫氧还蛋白还原酶重组蛋白。

9.根据权利要求6或7所述的硫氧还蛋白还原酶重组蛋白编码基因的表达方法，所述步骤(2)的载体为克隆载体，得到重组克隆载体，

所述步骤(3)为将重组克隆载体转化至感受态细胞，培养筛选得到阳性转化子，经菌落PCR筛选并测序确定为目标菌株；

所述步骤(4)是从目标菌株中提取质粒，瞬间转染到表达细胞，进行细胞培养，表达蛋白。

10.如权利要求1或2所述的硫氧还蛋白还原酶重组蛋白在硫氧还蛋白还原酶活性检测中的应用；优选所述硫氧还蛋白还原酶重组蛋白作为参比蛋白或者标准品辅助用于通过酶动力学方法检测离体生物样本中硫氧还蛋白还原酶活性水平。