[发明专利]从蝇蛆中分离蛆激酶的方法及应用

权利要求书

1.蛆激酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）原料蝇蛆进行清水清洗，按原料质量与水或缓冲液质量比为1: 3-15进行匀浆；

（2）匀浆液高速离心或过滤，除去杂质和不溶物，得到蛆激酶提取溶液；

（3）调节提取溶液的pH为4.5-6.0，在4-8℃静置，待有蛋白沉淀析出，离心去沉淀，收集上清液；

（4）用缓冲液将所述上清液平衡至pH 5~8，用0.45µm滤膜过滤，获得平衡好的澄清溶液；

（5）利用离子交换树脂，吸附（4）所获得的澄清溶液中的酶蛋白分子，洗脱后收集活性峰溶液；

（6）将溶液通过超滤或透析，进行脱盐，获得截留分子量为10000-50000道尔顿的蛋白溶液，经浓缩、脱盐至电导率100 µs/cm，得到蛋白浓缩液；

（7）浓缩液冷冻或真空干燥后，获得粗酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括：

（8）酶的精制：步骤（5）获得的活性峰溶液，透析脱盐、进行亲和吸附，收集洗脱峰，所用的亲和填料为其配体能吸附丝氨酸蛋白的填料；

（9）将洗脱的蛋白进行纯化，干燥后获得精制蛆激酶。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述缓冲液为PBS缓冲液。

4. 根据权利要求1所述的方法，其中所述缓冲液浓度为10-50 mM。

5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤（5）所述的离子交换树脂为阳离子交换树脂CM52。

6.根据权利要求2所述的方法，其中步骤（9）所述的干燥为冷冻干燥。

7.根据权利要求2所述的方法，步骤（8）的所述配体选自苯甲脒、对氨基苯甲脒、对氨基苯脒盐酸盐、精氨酸、慈菇蛋白酶抑制剂、大豆胰蛋白酶抑制剂和卵黏蛋白。

8.根据权利要求1所述的方法，步骤（1）中所述原料为选自家蝇属、厕蝇属、麻蝇科及丽蝇科的蝇蛆。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法获得的蛆激酶在制备抗血栓药物中的用途。

10.蝇蛆在制备蛆激酶中的用途，其特征在于，所述蝇蛆为选自家蝇属、厕蝇属、麻蝇科及丽蝇科的蝇蛆。