[发明专利]抗HPV53 L1蛋白单克隆抗体及其制备与应用

说明书

本发明涉及一种抗HPV53 L1蛋白单克隆抗体及其制备与应用，旨在解决HPV53亚型难以特异性识别的问题。该抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示、编码该重链可变区的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示、编码该轻链可变区的DNA序列如SEQ ID NO.3所示；该抗体可用于免疫学检测及疫苗、抗原、试剂盒等的制备中；本发明抗体能够特异性识别HPV53高危（HR）亚型，其灵敏度极高，并且与HPV53假病毒以及HPV53 L1蛋白都具有良好的反应性且不与其它亚型的L1蛋白发生交叉反应。

技术领域

本发明涉及生物免疫技术领域，具体涉及一种抗HPV53 L1蛋白单克隆抗体及其制备与应用。

背景技术

人乳头瘤病毒（ Human Papillomavirus，HPV）是无包膜的、20面体双链闭合环状DNA病毒，具有严格的种属特异性，主要感染人的皮肤和粘膜组织，可以通过性接触、皮肤接触和阴道分娩的微创伤口而感染，引起相应部位上皮组织的增生性病变。

HPV病毒衣壳由主要衣壳蛋白（L1）和次要衣壳蛋白（L2）组成。其中，L2蛋白为次要衣壳蛋白是高度可变核蛋白，反映HPV抗原的多态性。而L1蛋白是HPV病毒的主要衣壳蛋白，约占病毒蛋白总量的80%，为高度保守的糖蛋白，分子量为55～60kDa，具有高度的免疫原性，也是HPV分型的依据。按感染部位分类，HPV53归类为黏膜型病毒；按发癌性分类，HPV53归类为高危型病毒。HPV L1蛋白中有两个半胱氨酸：Cys175与Cys428，它们在所有HPV亚型中都很保守，二者间形成链内的二硫键，参与病毒样颗粒（virus-like particles，VLPs）的形成及病毒粒子稳定性的维持。

研究显示体外表达的HPV L1蛋白可自组装成VLPs结构。这种体外组装的VLPs结构与55 nm的天然的HPV病毒结构没有什么差别，经免疫后可诱导机体产生型别特异性中和抗体，可有效保护机体免受同型病毒的感染，因此这种基于VLPs结构的疫苗常用于预防HPV病毒感染。因此，HPV L1蛋白是研究HPV VLPs疫苗的关键，快速、特异、敏感的L1蛋白检测方法对研究HPV VLPs疫苗具有重要的意义。

目前检测HPV的方法主要有免疫组化、分子杂交、PCR等。由于HPV基因在体内以游离体或整合于宿主染色体的整合形式存在，上述形式下均无或仅有少量的外壳蛋白存在；因而在病变组织中很难分离到HPV的天然病毒，也正是基于此，HPV病毒抗原蛋白的检测在临床上很难得到应用。

而HPV L1蛋白检测技术的相关研究也相对较滞后。目前并未见报道有抗HPV 53L1蛋白的单抗。

因此，目前亟需制备出一种可以同时用ELISA、Western Blot等检测方法特异性识别HPV53亚型的L1蛋白的单克隆抗体。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在加深对本发明总体背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成本领域技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗HPV53 L1蛋白单克隆抗体，以解决HPV53亚型难以特异性识别的技术问题；该抗体能够应用于免疫学检测，也可为基于HPV L1蛋白的疫苗研制提供便利；同时公开了一种简单便捷的制备抗HPV53 L1蛋白单克隆抗体的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

筛选得到一种抗HPV53 L1蛋白单克隆抗体，包含如下序列或其活性修饰（添加、删除、替换）序列：

如SEQ ID NO.1所示的重链可变区DNA序列；如SEQ ID NO.2所示的重链可变区氨基酸序列；如SEQ ID NO.3所示的轻链可变区DNA序列；如SEQ ID NO.4所示的轻链可变区氨基酸序列。