[发明专利]一种小鼠2型糖尿病模型的构建及评价方法

权利要求书

1.一种2型糖尿病模型的造模方法，其特征在于，所述造模方法采用雌性昆明小鼠进行去势手术，去势手术恢复一周后高脂饮食喂养4周后，连续3天腹腔注射30mg/kg体重的链脲佐菌素，第4天注射80mg/kg体重链脲佐菌素，建立获得2型糖尿病模型。

2.如权利要求1所述的造模方法，其特征在于，所述造模方法还包括如下步骤：对雌性昆明小鼠进行去势手术前将体重为22g-26g的雌性昆明小鼠在室内温度22℃-25℃，相对湿度65％～70％的饲养室适应性饲养7天。

3.如权利要求1所述的造模方法，其特征在于，所述去势手术为卵巢切除术。

4.一种如权利要求1所述的2型糖尿病模型的评价方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)构建对照组，对照组小鼠构建步骤为选取体重为22g-26g的雌性昆明小鼠在室内温度22℃-25℃，相对湿度65％～70％的饲养室饲养7天，在无菌条件下，进行去势手术，去势手术恢复一周后高脂饮食饲养小鼠4周后，连续4天腹腔注射与权利要求1所述链脲佐菌素相同剂量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，即得对照组；

(2)将按照如权利要求1所述方法构建的2型糖尿病模型组与对照组继续高脂饮食喂养四周后，对两组小鼠进行离体心肌、腓肠肌和肝脏组织灌流实验判定胰岛素抵抗发生情况，若链脲佐菌素组小鼠离体心肌、腓肠肌和肝脏在生理糖水平耗糖量显著低于对照组p0.05，且在高糖水平时也显著低于对照组p0.05，则判定2型糖尿病模型造模成功，否则判定造模失败。

5.如权利要求4所述的2型糖尿病模型的评价方法，其特征在于，所述离体心肌灌流实验包含以下步骤：

(1)实验开始前30min打开恒温水浴泵和混合气罐，混合气罐包含95％O2和5％CO2，设定水温为37℃，打开灌流装置循环系统，调解气泡至细小而均匀；

(2)临用前配制K-H液，分两部分，一部分注入肌槽，另一部分置于培养皿，小鼠处死后，迅速打开胸腔，使用小镊子取出心脏，立即浸入通有混合气体并盛有K-H液的小烧杯中；

(3)注射针头插入主动脉缓缓注入缓冲液排除心脏内血液后转入准备好的培养皿中，针头固定心脏，从心尖沿室间至主动脉剪开左心室，随后沿瓣膜剪开右心室，暴露心室，两端缚线，一端固定于双极电极间，另一端连接到张力传感器，垂直悬挂于张力传感器与线连接处，以1Hz、1ms和阈值15±5V的电刺激刺激心肌，温育20min待心肌收缩活动稳定后，加入胰岛素(终浓度为0.02U/mL)，测定加入胰岛素前后0min，30min，60min，90min肌槽中糖浓度，记录不同处理组小鼠离体心肌在胰岛素处理前后的耗糖量。

6.如权利要求4所述的2型糖尿病模型的评价方法，其特征在于，所述离体腓肠肌灌流实验包含以下步骤：处死小鼠，取小鼠左腿置于供有混合气体并含有K-H溶液的培养皿中，剪断结缔组织与神经分支，分离出腓肠肌，用锌铜弓检查腓肠肌的兴奋性，一端缚线结扎与双极电极连接，另一端缚线结扎肌腱并连接至张力传感器，以1Hz、1ms和阈值15±5V的电刺激刺激腓肠肌，温育20min，采用BL-420S生物信号采集系统记录腓肠肌收缩活动，待收缩活动及基础张力稳定后，加入胰岛素(终浓度为0.02U/mL)，测定加入胰岛素前后0min，30min，60min，90min肌槽中糖浓度，记录不同处理组小鼠离体腓肠肌在生理糖水平和高糖水平时胰岛素处理前后的耗糖量。

7.如权利要求4所述的2型糖尿病模型的评价方法，其特征在于，所述离体肝脏灌流实验包含以下步骤：处死小鼠，横向剖开小鼠腹部，通过正向灌流，使灌流液进入肝门静脉，从肝下腔静脉输出，以排除肝脏内血液，取肝尾叶置于含混合气体与K-H液的培养皿中，维持离体肝正常的生理生化功能，缚线置于灌流肌槽内，温育20min后换液，在加入胰岛素(终浓度为0.02U/mL)前后0min，30min，60min，90min测灌流肌槽中糖的消耗情况，记录不同处理组小鼠离体肝脏在胰岛素处理前后的耗糖量。